एक अलग रेटिना के लिए आनुवंशिक लेबल रेटिना नाड़ीग्रन्थि कोशिकाओं से हल्की प्रतिक्रिया रिकॉर्ड तैयार
Summary
यह लेख कैसे काटना और माउस में अलग रेटिना तैयारी से रिकॉर्ड की एक विवरण प्रदान करता है. विशेष रूप में, हम वर्णन कैसे एक fluorescently लेबल नाड़ीग्रन्थि सेल की आबादी से प्रकाश प्रतिक्रियाओं को रिकॉर्ड करने के लिए और बाद में पहचान और उसके आकारिकी का विश्लेषण.
Abstract
हड्डीवाला दृष्टि में पहला कदम जगह ले जब प्रकाश 1 रेटिना के रॉड और कोन photoreceptors को उत्तेजित करता है. यह जानकारी तो क्या और पर बंद रास्ते के रूप में जाना जाता है में अलग है. photoreceptors संकेत द्विध्रुवी कोशिकाओं को प्रकाश जानकारी (BCS), जो (BCS) प्रकाश की तीव्रता में बढ़ जाती है या कम हो जाती है (BCS के बाहर) के जवाब में बिगाड़ना. प्रकाश सूचना के इस अलगाव रेटिना नाड़ीग्रन्थि कोशिकाओं (RGCs) है, जो या तो भीतर plexiform (आईपीएल) परत है, जहां वे ऑफ BCS से प्रत्यक्ष उत्तेजक इनपुट प्राप्त ऑफ sublamina में stratifying dendrites के स्तर पर बनाए रखा है, या में stratifying आईपीएल में sublamina, जहां वे BCS में से प्रत्यक्ष उत्तेजक इनपुट प्राप्त है. रोशनी में (और रास्ते के बाहर) में बढ़ जाती है या कम हो जाती है के बारे में जानकारी के इस अलगाव संरक्षित है और समानांतर में मस्तिष्क को संकेत है.
RGCs रेटिना के उत्पादन की कोशिकाओं रहे हैं, और इस प्रकार एक महत्वपूर्ण सेल करने के क्रम में अध्ययन करने के लिए समझने के लिए कैसे प्रकाश जानकारी मस्तिष्क में दृश्य नाभिक के लिए संकेत है. हाल के दशकों में माउस आनुवंशिकी के क्षेत्र में अग्रिम फ्लोरोसेंट संवाददाता माउस लाइनों जहां विशिष्ट RGC आबादी एक फ्लोरोसेंट प्रोटीन के साथ लेबल रहे हैं RGC 2 3 4 उपप्रकारों और विशिष्ट electrophysiological रिकॉर्डिंग के लिए लक्ष्यीकरण की पहचान के लिए अनुमति देने की एक किस्म में हुई है. यहाँ, हम एक अक्षुण्ण, अलग रेटिना तैयारी में fluorescently लेबल नाड़ीग्रन्थि कोशिकाओं से प्रकाश प्रतिक्रियाओं रिकॉर्डिंग के लिए एक विधि प्रस्तुत करते हैं. यह पृथक रेटिना तैयारी RGCs जहां वृक्ष के समान कुंज बरकरार है और पूरे RGC वृक्ष के समान कुंज भर में जानकारी संरक्षित कर रहे हैं से रिकॉर्डिंग के लिए अनुमति देता है. इस विधि नाड़ीग्रन्थि सेल subtypes के एक किस्म में लागू होता है और एकल कोशिका शारीरिक तकनीक की एक विस्तृत विविधता के लिए उत्तरदायी है.
Protocol
Discussion
इस तकनीक को एक अलग रेटिना से किसी भी रेटिना नाड़ीग्रन्थि सेल रिकॉर्डिंग के लिए लागू है. हालांकि ऊपर प्रयोग किया जाता माउस लाइन में आंतरिक रूप से सहज, melanopsin-व्यक्त RGCs EGFP 2, 5 के साथ लेबल रहे हैं, इस प्रोटोक?…
Acknowledgements
इस काम के हिस्से में R01EY012949 एनआईएच, R21EY018885, EY0707133 T32 से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था. हम अपने तकनीकी सहायता के लिए डार्विन रुको धन्यवाद.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Ames’ Medium | Sigma | A1420 | ||
| Collagenase | Whorthington Biochemical | LS005273 | ||
| Hyaluronidase | Whorthington Biochemical | LS002592 | ||
| Sodium Bicarbonate | Sigma | S5761 | ||
| AlexaFluor 594 Hydrazyde | Invitrogen | A10442 | ||
| Neurobiotin | Vector Laboratories | SP1120 | ||
| Electrodes | Sutter Instruments | BF120-69-10 | ||
| Forceps | Fine Science Tools | 11252-30 | ||
| Ophthalmologic Scissor | Fine Science Tools | 15000-00 | ||
| Streptavidin 594 | Invitrogen | S32356 | ||
| Vectashield | Vector Laboratories | H-1000 | ||
| Goat Serum | Jackson ImmunoResearch | 005-000-001 | ||
| Triton X-100 | Sigma | T8787 | ||
| Paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences | 19210 |
Referências
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