环境引起的遗传亚麻的变化

1。亚麻诱导条件下生长。 5“盆用土填充和坚定。 每锅三种子种植¼英寸深和土壤的种子落实。 盆，然后浇水，适当的营养液百毫升非诱导对照组（C）条件下使用一个1 / 10的力量创造奇迹的格罗每星期。高营养状况（氮磷钾治疗）有充分的力量奇迹增长每星期。低营养 – 植物只有在其整个发展应用的自来水。 （达兰特1971年，库里斯1980年）。 自然光下的植物生长在夏季。他们在冬季种植与16 / 8小时，光/暗周期下钠灯。 每周一班的叶和分生组织收集。 植物材料在液氮速冻。 结果在3个基因型的生长在不同的条件（图1）的相对比率。因此，控制的条件下的PL线最好用L比S（图1a）的大力增长。在低养分（水），S成长优于L或PL（图1b）。在高养分（氮磷钾）长的增长比PL只增长比S（图1c）稍微好一点。三个不同的治疗下生长的每个线之间的比较显示在图1 D – F。 PL增长最好控制的条件下（图1d），高营养和控制条件下同样大号下最好的高营养（图1e）和S（图1F）。 这些数据表明，基于他们的三种环境下的生长，可以区别的三条线。值得注意的是，PL控制条件下生长最好而L增长最好的下氮磷钾条件（诱导）。在所有这三个条件，即它不能改善营养条件的优势，但在非常低营养条件下能够更好地成长，小号的增长大致相同。 有关植物的分化生长参数包括（间长度，即每一片叶子之间的距离）的株高，叶片大小和分支的程度。对于PL控制条件下的植物是用树枝高大，叶大和深绿色。在低营养的植物很短，每一片叶子之间的距离也很短，叶子是绿色体积小，重量轻。尖的叶子比那些低下来的干较暗的绿色。在高营养的植物看起来非常相似，控制的条件下，除了主茎和方竹笋比对照植株在短。对于大型genotroph的植物看起来非常相似的PL者，但最具活力的增长下的高营养。下再次低营养的植物很短，浅绿色的叶子。同样的S genotroph增长在所有三个环境虽然在低养分较轻的绿色叶片。然而，在低营养条件下的S genotroph是严厉得多的PL或L线之一。 2。 RNA和DNA的提取亚麻分生组织和叶分别进行。罗氏公司的总RNA制备试剂盒用于RNA的提取和Qiagen公司DNeasy植物DNA制备试剂盒的DNA提取使用。 RNA的提取 3分生组织中加上一些周边叶移动存储离心管，Eppendorf管中，并置于液氮，直至地面。 添加到无菌砂管和地面使用，直到精细micropestle组织。 400 UL罗氏总RNA准备试剂盒的裂解/结合缓冲液中添加和组织进一步的地面，直到没有团块可见。 样品振荡15秒，以帮助裂解和纺1分钟13,000转，收集砂和任何杂物。 上清液加入离心柱，随后其余的RNA制备试剂盒说明书的指示。 DNA酶处理 10X DNA酶缓冲液的样品量的1 / 10的RNA。 30个单位的DNA酶是添加反应是在37℃孵育° C为30分钟，70℃5分钟。 反转录美国应用生物系统公司的RNA的cDNA试剂盒是用来为每方向，反应孵育在37℃，1小时和95 ° C为5分钟。 然后用PCR或为定量PCR的cDNA 定量PCR 定量PCR进行使用ABI步骤的一个系统。在每次运行时，所有检测一式三份。肌动蛋白基因被用来作为一个拷贝数控制最好的看家基因。 适当的引物被添加到每个试管中加入1μl。 的cDNA稀释至适当浓度和9μl添加到每个管 2x电源SYBR GREEN PCR反应试剂（ABI）的10μL，被添加到每个管该计划扩增程序是： 10分钟在95 ° C 15秒40的周期在95℃，在60℃1分钟热变性步骤，以验证扩增的特异性相对表达水平进行了测定值2（CTunknown – CTactin）。 DNA的制备 Qiagen公司DNeasy植物DNA制备试剂盒缓冲AP1的是添加到6叶无菌砂在离心管。该组织是地面与micropestle，直到没有团块可见。 按照试剂盒说明书。 结果从各个岗位沿干叶中分离出DNA PCR扩增表明，LIS – 1的外观发生，而植物的诱导条件下（4）发展。定量PCR结果显示，LIS – 1（或其他基因组相关的变化与感应）的存在会影响基因的表达在紧邻LIS – 1（图2）。在图2所示的六个基因差异表达的都是四份报告具有较高的表达在PL（不含​​LIS – 1）和2个具有较高的表达（确实有LIS – 1）在S PL和S。面板1和2 LIS – 1插入点最接近的两个基因。将需要在大genotroph（这已经改变而引起的，但没有LIS – 1）和不同的生长条件下的表达，这些基因的表达，以确定任何LIS – 1表达的变化之间的因果关系。 图1。PL，L和S三种不同的营养制度下成长。面板 – 控制，B – 低营养和C – 三元复合肥。 D – PL，E – S，F – 属面板ð – F从左至右：低营养，控制和NPK。 D – PL，E – L，F – S。 图2。LIS – 1插入点周围的基因表达。基因1（生长抑制剂）5'立即LIs1和LIS – 1基因2（硖相关细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂ID 3“的其他基因，沿着相同的脚手架从内置（〜500KB）完整的亚麻基因组序列。请点击这里查看大图 。 图3：从个人的斯托蒙特Cirrus的低营养条件下生长的植物叶中提取的DNA的PCR扩增。 2％的琼脂糖TBE凝胶分离PCR产物。 uninserted网站事务委员会所示，两端插入网站显示面板B和C叶样品1 – 6被隔离在样品1，播种后最早每周一班。