모니터링 형성과 Antifungal 자화율 테스트를위한 96 자 Microtiter 플레이트 기반 방법 캔디다 albicans Biofilms
Summary
우리는 형성을위한 간단하고 신속하고 강력한 방법을 설명<em> 캔디다 albicans</embiofilms 내에서 세포의 antifungal 자화율 시험에 96 잘 microtiter 접시와 유틸리티를 사용하여> biofilms.
Abstract
캔디다 albicans 지금은 미국 병원에서 세 번째로 가장 일반적인 감염 위험 환자와 칸디다 증의 확대 인구의 곰팡이 감염의 가장 빈번한 원인 남아있다. 칸디다 증의 발현은 다른 호스트 조직 및 / 또는 의료 기기 (즉 카테터)에 두 biofilm 형성과 관련이 있습니다. biofilms 내에서 세포가 면역 반응 호스트로부터 antifungals의 행동으로부터 보호되면서 Biofilm 형성은 부정적인 임상 영향을 수행합니다. 우리는 C. 형성을위한 간단하고 신속하고 강력한에서 체외 모델을 개발 또한 biofilm antifungal 자화율 시험에 사용할 수있는 96 잘 microtiter – 접시를 사용 albicans의 biofilms. 이 분석의 판독은 metabolically 활성 곰팡이 biofilm 세포에 의해 XTT의 감소 (tetrazolium 소금)을 기반으로, colorimetric입니다. 전형적인 실험은 antifungal 자화율 시험에 대한 추가 24 H와 biofilm 형성에 대한 약 24 H 걸립니다. 때문에 단순하고 일반적으로 사용 가능한 실험실 재료 및 장비의 사용이 기술은 biofilm 조사를 democratizes 및 곰팡이 biofilms의 antifungal 자화율 테스트 표준화 향한 중요한 단계를 나타냅니다.
Protocol
Discussion
여기 XTT를 사용하여 biofilm 내에서 세포의 대사 활동을 측정 colorimetric 방법으로 결합 캔디다 biofilms의 형성을위한 단순하고 신속하고 경제적이며 높은 재현성 96 웰 플레이트 microtiter 모델을 설명합니다. biofilm 형성을위한이 96 잘 microtiter 플레이트 모델은 원래 C. 위해 개발되었습니다 albicans하지만 다른 캔디다 종에 사용될 수 있습니다. 쉽게 다른 곰팡이 유기체에 대한 ?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
실험실에서 Biofilm 관련 작업은 부여에 의해 자금 치과 & Craniofacial 연구 및 알레르기 및 전염병 (JLL – R 있습니다.)에 대한 국립 연구소의 국립 연구소에서 R21DE017294 및 R21AI080930 번호가 있습니다. 내용은 전적으로 저자의 책임이며 반드시 NIDCR, NIAID 또는 NIH의 공식 견해를 대변하지 않습니다.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Sabouraud-dextrose agar | Becton Dickinson | 211584 | To prepare plates for fresh subcultures of fungal isolates | |
| YPD: Yeast peptone dextrose | US Biological | Y2076 | Medium for propagation of overnight liquid cultures | |
| RPMI-1640 without sodium bicarbonate supplemented with L-glutamine | Cellgro | 50-020-PB | Liquid medium for biofilm formation | |
| Morpholinepropanesulfonic acid (MOPS) | Fisher | BP308 | To buffer RPMI 1640 | |
| Phosphate buffered saline, PBS | Sigma | P4417 | Buffer for washes | |
| XTT sodium salt | Sigma | X4251 | See above for preparation instructions | |
| Ringer’s lactate | Hospira | NDC0409-7953-09 | For preparation of XTT solution | |
| Menadione | Sigma | M5625 | Caution: hazardous by skin contact, inhalation or ingestion | |
| Petri dishes | Fisher | 08-757-12 | ||
| 15 ml conical centrifuge tubes | Corning | 430790 | ||
| 50 ml conical centrifuge tubes | Corning | 430828 | ||
| 96 well microtiter plates: Polystyrene, flat-bottomed, tissue culture treated | Corning | 3595 | ||
| Multichannel pipette and tips | Eppendorf | |||
| Incubator | Any | |||
| Microtiter plate reader | Any |
Referências
- Bachmann, S. P. In vitro activity of caspofungin against Candida albicans biofilms. Antimicrob Agents Chemother. 46, 3591-3596 (2002).
- Hawser, S. P., Norris, H., Jessup, C. J., Ghannoum, M. A. Comparison of a 2,3-bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenylamino)carbonyl]-2H-t etrazolium hydroxide (XTT) colorimetric method with the standardized National Committee for Clinical Laboratory Standards method of testing clinical yeast isolates for susceptibility to antifungal agents. J Clin Microbiol. 36, 1450-1452 (1998).
- Kuhn, D. M., Balkis, M., Chandra, J., Mukherjee, P. K., Ghannoum, M. A. Uses and limitations of the XTT assay in studies of Candida growth and metabolism. J Clin Microbiol. 41, 506-508 (2003).
- Kuhn, D. M., George, T., Chandra, J., Mukherjee, P. K., Ghannoum, M. A. Antifungal susceptibility of Candida biofilms: Unique efficacy of amphotericin B lipid formulations and echinocandins. Antimicrob. Agents Chemother. 46, 1773-1780 (2002).
- Nobile, C. J., Mitchell, A. P. C. albicans transcription factor Bcr1p: a regulator of cell-surface genes and biofilm formation. Current Biol. 15, 1150-1155 (2005).
- Ramage, G., Saville, S. P., Thomas, D. P., Lopez-Ribot, J. L. Candida biofilms: an update. Eukaryot Cell. 4, 633-638 (2005).
- Ramage, G., Vande Walle, K., Wickes, B. L., p, B. L., Lopez-Ribot, J. L. Standardized method for in vitro antifungal susceptibility testing of Candida albicans biofilms. Antimicrob Agents Chemother. 45, 2475-2479 (2001).
- Bachmann, S. P. Antifungal combinations against Candida albicans biofilms in vitro. Antimicrob Agents Chemother. 47, 3657-3659 (2003).
- Ramage, G., VandeWalle, K., Bachmann, S. P., Wickes, B. L., Lopez-Ribot, J. L. In vitro pharmacodynamic properties of three antifungal agents against preformed Candida albicans biofilms determined by time-kill studies. Antimicrob Agents Chemother. 46, 3634-3636 (2002).
- Ramage, G., VandeWalle, K., Wickes, B. L., López-Ribot, J. L. Characteristics of biofilm formation by Candida albicans. Rev. Iberoam. Micol. 18, 163-170 (2001).
- Tellier, R., Krajden, M., Grigoriew, G. A., Campbell, I. Innovative endpoint determination system for antifungal susceptibility testing of yeasts. Antimicrob Agents Chemother. 36, 1619-1625 (1992).
- Nett, J., Andes, D. Candida albicans biofilm development, modeling a host-pathogen interaction. Curr Opin Microbiol. 9, 340-345 (2006).
