ऑप्टिक तंत्रिका transection: केन्द्रीय तंत्रिका तंत्र में वयस्क न्यूरॉन Apoptosis के एक मॉडल
Summary
ऑप्टिक तंत्रिका transection वयस्क सीएनएस चोट के एक मॉडल व्यापक रूप से इस्तेमाल किया है. रेटिना नाड़ीग्रन्थि कोशिकाओं के नब्बे प्रतिशत (RGCs) axons जिसका पूरी तरह से (axotomy) transected axotomy के बाद 14 दिनों के भीतर मर जाते हैं. इस मॉडल को आसानी से प्रयोगात्मक अभिव्यक्ती करने के लिए उत्तरदायी है और अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य है.
Abstract
रेटिना नाड़ीग्रन्थि कोशिकाओं (RGCs) सीएनएस न्यूरॉन्स रहे हैं कि उत्पादन रेटिना से मस्तिष्क के लिए ऑप्टिक तंत्रिका के माध्यम से दृश्य, सूचना. ऑप्टिक तंत्रिका आँख की कक्षा के भीतर पहुँचा जा सकता है और पूरी तरह से (axotomized) transected पूरे RGC जनसंख्या के axons काटने है. ऑप्टिक तंत्रिका transection वयस्क 1-4 सीएनएस में एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य apoptotic neuronal सेल मौत का मॉडल है. यह मॉडल विशेष रूप से आकर्षक है क्योंकि आँख के शीशे चैम्बर दवा रेटिना को प्रसव के लिए एक कैप्सूल के रूप में कार्य करता है, intraocular इंजेक्शन के माध्यम से प्रयोगात्मक अभिव्यक्ती की अनुमति है. कांच तरल पदार्थ के माध्यम से रसायनों के प्रसार सुनिश्चित करता है कि वे संपूर्ण RGC जनसंख्या पर कार्रवाई. इसके अलावा, RGCs चुनिंदा कटौती को समाप्त करने के लिए अपने लक्ष्य, बेहतर colliculus 8 में ऑप्टिक तंत्रिका 5-7 या इंजेक्शन वैक्टर के कम हस्तक्षेप (siRNAs) RNAs, plasmids, या वायरल vectors लागू करने के द्वारा ट्रांसफ़ेक्ट किया जा सकता है. यह शोधकर्ताओं अन्य दर्शक न्यूरॉन्स या आसपास glia पर confounding प्रभाव के बिना वांछित neuronal आबादी में apoptotic तंत्र का अध्ययन करने के लिए अनुमति देता है. एक अतिरिक्त लाभ आसानी और सटीकता के साथ जो सेल अस्तित्व चोट के बाद मात्रा निर्धारित किया जा सकता है. रेटिना एक फ्लैट, स्तरित ऊतक है और RGCs अंतरतम परत, नाड़ीग्रन्थि सेल परत में स्थानीयकृत हैं. RGCs के अस्तित्व ऑप्टिक तंत्रिका की कटौती अंत axotomy के समय में एक फ्लोरोसेंट अनुरेखक (3% Fluorogold) लागू करके, या बेहतर colliculus (RGC लक्ष्य) एक के लिए पहले सप्ताह में ट्रेसर का इंजेक्शन लगाने के द्वारा समय पर लगाया जा सकता है है axotomy. ट्रेसर retrogradely, जाया जाता है, पूरे RGC जनसंख्या लेबलिंग. क्योंकि नाड़ीग्रन्थि सेल परत में एक monolayer (एक मोटी सेल) है, तो RGC घनत्व फ्लैट घुड़सवार ऊतक में मात्रा निर्धारित किया जा सकता है stereology के लिए आवश्यकता के बिना. ऑप्टिक तंत्रिका transection 14 postaxotomy 9-11 दिनों के भीतर घायल RGCs के 90% के apoptotic मौत की ओर जाता है है . RGC apoptosis को एक बार पाठ्यक्रम विशेषता है जिससे कोशिका मृत्यु 3-4 दिनों postaxotomy, जिसके बाद कोशिकाओं के तेजी से पतित देरी हो रही है. यह प्रयोगात्मक apoptosis में शामिल रास्ते के खिलाफ निर्देशित जोड़तोड़ के लिए एक समय खिड़की प्रदान करता है.
Protocol
Discussion
इस शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया के कई रूपों हैं, और इस प्रोटोकॉल में कदम के कई आवश्यक नहीं हैं. यह केवल मांसपेशियों कि ऑप्टिक तंत्रिका overlie क्रम में तंत्रिका करने के लिए पहुँच प्राप्त वापस लेना आवश्यक है. ह…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
पी डी CIHR ऑपरेटिंग अनुदान (86,523 एमओपी) द्वारा समर्थित है
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Stereotaxic Frame | Stoelting, Kopf, WPI | |||
| Rat Gas Mask | Stoelting, Kopf, WPI | |||
| Anesthesia System | VetEquip | 901806 | ||
| Isoflurane (PrAErrane) | Baxter Corp | DIN 02225875 | ||
| Surgical Microscope | WPI, Zeiss, Leica | |||
| Fluorogold -(Hydroxystilbamidine bis(methanesulfonate) | Sigma | 39286 | ||
| Gelfoam | Pharmacia & Upjohn | |||
| Tears Naturale P.M. | Alcon | |||
| Proviodine | Medline | MDS093945H | ||
| Vannas spring scissors | Fine Science Tools | 15000-00 | ||
| Fine tip Dumont forceps | Fine Science Tools | 11252-00 | ||
| Micro surgical hook | Fine Science Tools | 10062-12 | ||
| Eye dressing serrated forceps | Fine Science Tools | 11152-10 | ||
| Dumont #7b sharp curved serrated forceps | Fine Science Tools | 11270-20 | ||
| Cauterizer | Fine Science Tools | 18010-00 |
Referências
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