以下协议提供馈线自由的文化,使用完整的基因敲除血清替代馈线培养基(KSR – FF)为适应人类诱导多能干细胞(iPS)细胞的指令。一旦适应,也提供了不断维护的说明。
在2006年的发现,人类和小鼠成纤维细胞可以重新编程,以产生iPS细胞与胚胎干细胞非常相似的特质1-3创造了一个有价值的新来源,为药物开发,细胞治疗和基础研究的多能干细胞。
GIBCO公司媒体和试剂已在多年的多能干细胞研究的前沿。淘汰赛的DMEM淘汰赛血清替代补充是胚胎干细胞的生长和现在的iPS细胞培养3-9的首选媒体。这个黄金标准的媒体系统现在可以用于馈线自由的文化,除了与基因敲除的SR生长因子鸡尾酒。
传统的人类ES和iPS细胞培养的方法需要使用鼠标或人类成纤维细胞饲养层,或馈线条件培养基。这些文化的方法是劳动密集型,规模是难以维持臀部细胞的未分化由于未定义的条件。 Invitrogen公司开发了淘汰赛的SR生长因子鸡尾酒,让您可以轻松地转型你的臀部细胞培养馈线,同时仍保持了您的使用基因敲除的SR。
The authors have nothing to disclose.
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
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Knockout DMEM/F12 | Cat. no. 12660-012 | Note: see appendix for the use of alternative DMEM products | ||
GlutaMAX-I | Cat. No. 35050-061 | |||
KnockOut Serum Replacement | KnockOut SR, Cat. no. 10828-028 | |||
KnockOut Serum Replacement Growth Factor Cocktail | KnockOut SR-GFC, Cat. no. A10580-01 | |||
FGF-basic, human recombinant protein, 10 μg | bFGF, Cat. no. PHG0024 | Note: see appendix for alternative bFGF pack sizes. | ||
2-Mercaptoethanol | Cat. no. 21985-023 | |||
Dispase | Cat. no. 17105-041 | Note: see appendix for alternative passaging methods. | ||
Geltrex hESC-Qualified Reduced Growth Factor Basement Matrix, 1 mL | Cat. no. A10480-01 | |||
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline (D-PBS) without calcium and magnesium | Cat. no. 14190-144 | |||
Sterile Tissue Culture Hood | ||||
Incubator set at 37°C | ||||
Pipette-Aid | ||||
Water Bath set at 37°C | ||||
Sterile serological pipettes (5 mL, 10 mL) | ||||
Centrifuge | ||||
15 mL centrifuge tubes | ||||
60mm Tissue Culture treated dishes |