Enzyme-linked Immunospot Assay (ELISPOT): Quantifizierung von Th-1 zelluläre Immunantworten gegen mikrobielle Antigene
Summary
Identifizierung von mikrobiellen Ziele der adaptiven Immunität bei idiopathischer Krankheiten können durch die Verwendung des enzyme-linked immunospot Test durchgeführt werden.
Abstract
Adaptive Immunität ist ein wichtiger Bestandteil der Freigabe von intrazellulären Erregern. Die Fähigkeit zur Detektion und Quantifizierung dieser Reaktionen beim Menschen ist ein wichtiges diagnostisches Werkzeug. Die enzyme-linked immunospot Assay (ELISPOT) ist an Popularität gewinnt für seine Fähigkeit, zelluläre Immunantworten gegen mikrobielle Antigene, einschließlich immunsupprimierten Bevölkerungsgruppen wie Menschen mit einer HIV-Infektion, Transplantation und Verwendung von Steroiden zu identifizieren. Dieser Test hat die Fähigkeit, die Immunantwort gegen spezifische mikrobielle Antigene, sowie zu unterscheiden, ob diese Antworten Th1-oder Th2-Charakter sind zu quantifizieren. ELISPOT ist nicht auf den Ort der Entzündung begrenzt. Es ist in seiner Fähigkeit, für Immunreaktionen im peripheren Blut, sowie Stellen der aktiven Beteiligung wie BAL, Liquor, Aszites und bewerten vielseitig. Erkennung von Immunantworten gegen ein einzelnes oder mehrere Antigene möglich ist, sowie spezifische Epitope innerhalb mikrobieller Proteine. Dieser Test ermöglicht Nachweis von Immunreaktionen im Laufe der Zeit, als auch Unterschiede in Antigenen von Host-T-Zellen erkannt. Zweifarbige ELISPOT-Assays zur Verfügung für den Nachweis der gleichzeitigen Expression von zwei Zytokinen. Aktuelle Anwendungen für diese Technik sind Diagnose der extrapulmonalen Tuberkulose, sowie Untersuchung des Beitrags von infektiösen Antigenen zu Autoimmunerkrankungen.
Protocol
Discussion
Der ELISPOT-Assay wurde als einer der wichtigsten und am häufigsten verwendeten Tests entstanden, um Immunantworten im Menschen zu überwachen und eine Vielzahl anderer Arten. Mit dem ELISPOT-Assay kann Immunzellen Frequenzen bei der einzelnen Zelle Ebene ohne Ausbau oder Manipulation von Zellpopulationen gemessen werden. ELISPOT-Assay wurde in großem Umfang angewendet, um Antigen-spezifische Immunantwort in verschiedenen Krankheiten, darunter Infektionen, Krebs, Allergien und Autoimmunerkrankungen untersuchen. Die An…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Unterstützte teilweise durch Vanderbilt CTSA Grant 1 UL1 RR024975 vom National Center for Research Resources, National Institutes of Health. Diese Arbeit wurde vom NIH R01 HL 83839 finanziert werden; R01 AI 65744.
Materials
A. Preparation of Media
B. Preparation of Tris Buffer
- Add 800 ml of ddH2O to 1 L beaker.
- Measure 12 grams of Tris and add to the beaker.
- Add 0.12 grams of magnesium chloride hexahydrate (MgCl2:6H2O) into the beaker.
- Stir with magnetic stirring rod on automatic stirring plate.
- Once dissolved, pH the solution to 9.5.
- Add 200 mL of ddH2O to the beaker, bringing it up to 1000mL.
- Filter the solution with a 0.22 μm filter.
C. Materials necessary for ELISPOT analysis:
Referências
- Dosanjh, D. P., Hinks, T. S., Innes, J. A., Deeks, J. J., Pasvol, G., Hackforth, S., Varia, H., Millington, K. A., Gunatheesan, R., Guyot-Revol, V., Lalvani, A. Improved diagnostic evaluation of suspected tuberculosis. Ann Intern Med. 148, 325-336 (2008).
- Sung, H. K. E. Diagnosis of abdominal tuberculosis by T-cell based assays on peripheral blood and peritoneal fluid mononuclear cells. Journal of Infection. 59, 409-415 (2009).
- Kim, S. -. H. Diagnosis of Central Nervous System Tuberculosis by T-Cell-Based Assays on Peripheral Blood and Cerebrospinal Fluid Mononuclear Cells. Clinical and Vaccine Immunology. , 1356-1362 (2008).
- Drake, W. P., Dhason, M. S., Nadaf, M., Shepherd, B. E., Vadivelu, S., Hajizadeh, R., Newman, L. S., Kalams, S. A. Cellular recognition of Mycobacterium tuberculosis ESAT-6 and KatG peptides in systemic sarcoidosis. Infect Immun. 75, 527-530 (2007).
- Allen, S. S., Evans, W., Carlisle, J., Hajizadeh, R., Nadaf, M., Shepherd, B. E., Pride, D. T., Johnson, J. E., Drake, W. P. Superoxide dismutase A antigens derived from molecular analysis of sarcoidosis granulomas elicit systemic Th-1 immune responses. Respir Res. 25, 36-36 (2008).
- Mutsvangwa, J., Millington, K. A., Chaka, K., Mavhudzi, T., Cheung, Y. B., Mason, P. R., Butterworth, A. E., Corbett, E. L., Lalvani, A. Identifying recent Mycobacterium tuberculosis transmission in the setting of high HIV and TB burden. Thorax. 65, 315-320 (2010).
- Streeck, H., Frahm, N., Walker, B. D. The role of IFN-gamma Elispot assay in HIV vaccine research. Nat Protoc. 4, 461-469 (2009).
- Chaudhary, N., Staab, J. F., Marr, K. A. Healthy human T-Cell Responses to Aspergillus fumigatus antigens. PLoS One. 5, e9036-e9036 (2010).
- Manigold, T., Mori, A., Graumann, R., Llop, E., Simon, V., Ferr, S. M., Valdivieso, F., Castillo, C., Hjelle, B., Vial, P. Highly differentiated, resting gn-specific memory CD8+ T cells persist years after infection by andes hantavirus. PLoS Pathog. 6, e1000779-e1000779 (2010).
- Ndongala, M. L., Kamya, P., Boulet, S., Peretz, Y., Rouleau, D., Tremblay, C., Leblanc, R., Côté, P., Baril, J. G., Thomas, R., Vézina, S., Boulassel, M. R., Routy, J. P., Sékaly, R. P., Bernard, N. F. Changes in function of HIV-specific T-cell responses with increasing time from infection. Viral Immunol. 2, 159-168 (2010).
