3幼虫节段性神经的可视化 RD龄果蝇幼虫的筹备工作
Summary
果蝇幼虫提供了一个理想的模型系统调查内幼虫节段性神经轴突运输的机制。使用此过程中， 第三龄幼虫携带各种突变可以比野生型幼虫。
Abstract
果蝇作为研究的发展和神经系统的功能强大的模型系统，特别是由于其方便的遗传学和完全测序的基因组，新兴。此外，幼虫的神经系统是一个理想的模型系统研究轴突运输机制，幼虫节段性神经束包含其细胞位于大脑和身体的长度沿结束他们的神经末梢内的机构轴突。在这里，我们描述幼虫节段性神经突触囊泡蛋白的可视范围内的程序。如果做得正确，对神经系统的所有组件，连同相关的组织，如肌肉和NMJs，保持完好，无破损，并准备要可视化。 第三龄幼虫携带各种突变解剖，固定，与突触囊泡抗体孵育，可视化和比较野生型幼虫。此过程可适应几种不同的突触或神经抗体和多种蛋白质分布的变化，可以很容易地观察到幼虫节段性神经内。
Protocol
1。试剂的制备准备1X夹层缓冲区使用128毫米氯化钠，4MM，4MM 氯化钙氯化镁2，2毫米氯化钾，5MM HEPES和36mm的蔗糖。 PH值至7.2的解决方案和过滤消毒。 准备使用1:1稀释16％的甲醛和1个夹层缓冲固定液。 准备1X PBT的使用1X的磷酸盐缓冲液（PBS），PH值在7.2和Triton X – 100的一个比例为1:100。 准备5％牛血清白蛋白（BSA）的0.01％，钠叠氮化物在1X PBS。 <p cla…
Discussion
果蝇幼虫节段性神经是一个功能强大的系统研究轴突运输的机制。如果正确执行， 第三龄幼虫清扫的中枢神经系统，百佳，和相关的组织，如肌肉和NMJs，的所有组件都可以在一个单一的幼虫研究。我们已经适应了从赫德和萨克斯顿（1996年）出版的一本议定书。该协议还可以适应测试其他神经元抗体，但抗体的优化应该做。小学和中学的抗体孵育时间可以改变，可以添加或阻塞的?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
SG是从美国纽约州立大学布法罗分校和约翰R. Oishei基金会的资金支持。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Dumont #5 Forceps | Fine Science Tools, Inc. | 11252-20 | ||
| Minutien Pins, Stainless Steel | Fine Science Tools, Inc. | 26002-10 | ||
| Mcpherson-Vannas Straight Blade 8cm Scissors | Fisher Scientific | 50822236 | ||
| Vectashield, Mounting Medium | Vector Laboratories, Inc. | H-1000 | ||
| Sylgard 184 Silicone elastomer | Dow Corning Corporation | 4026148 | ||
| formaldehyde, 16% | Electron Microscopy Sciences | 15710 | ||
| dCSP3 | Developmental Studies Hybridoma Bank | |||
| Alexa Fluor 568 Goat Anti-Mouse IgG | Invitrogen | A-11004 |
Referências
- Gunawardena, S., Goldstein, L. Disruption of Axonal Transport and Neuronal Viability by Amyoid Precursor Protein Mutations in Drosophila. Neuron. 32 (2), 389-401 (2001).
- Gunawardena, S., Her, L. S., Brusch, R. G., Laymon, R. A., Niesman, I. R., Gordesky-Gold, B., Sintasath, L., Bonini, N. M., Goldstein, L. S. Disruption of axonal transport by loss of huntingtin or expression of pathogenic polyQ proteins in Drosophila. Neuron. 40 (1), 1-2 (2003).
- Hurd, D. D., Saxton, W. M. Kinesin mutations cause motor neuron disease phenotypes by disrupting fast axonal transport in Drosophila. Genética. 144 (3), 1075-1085 (1996).
- Zinsmaier, K. E., Eberle, K. K., Buchner, E., Walter, N., Benzer, S. Paralysis and early death in cysteine string protein mutants of Drosophila. Science. 263, 977-980 (1994).
Citar este artigo
Fye, S., Dolma, K., Jung Kang, M., Gunawardena, S. Visualization of Larval Segmental Nerves in 3rd Instar Drosophila Larval Preparations. J. Vis. Exp. (43), e2128, doi:10.3791/2128 (2010).