Inyección intraperitoneal en adultos de pez cebra

Inyección intraperitoneal de cinco pasos: en ayunas, con un peso, anestesia, la inyección, y la recuperación. Para cada etapa existen las mejores prácticas que pueden garantizar el éxito. El éxito incluye un paciente saludable de peces, así como un buen resultado del experimento.

Ayuno: Un ayuno de 24 horas debe vaciar el bulbo intestinal. Esta práctica se ha tomado de la literatura de pescado veterinaria (por ejemplo, Brown 1993). Consideraciones adicionales en ayunas se discuten a continuación.

A largo plazo en ayunas: Hemos descubierto que un ayuno de 72 horas es necesario para disminuir la glucosa en sangre a un nivel de referencia antes de la inyección (Eames et al, 2010).. También hemos encontrado que para los estudios de la glucosa son varios los procedimientos que se requieren para garantizar que el pescado en ayuno correctamente. Comience con un tanque limpio (sin restos en la parte inferior). Los tanques deben estar fuera de línea, claramente etiquetados como "ayuno", y en un lugar donde entusiasta personal de atención de los peces no les dará de comer. Evaluar el ambiente externo de la cisterna y tomar medidas para evitar que los peces se hizo hincapié en las perturbaciones, como el estrés se sabe que aumentan la glucosa en sangre (Chavín y Young, 1970;. Groff et al, 1999). Por ejemplo, tuvimos un experimento de ayuno en la que fue operado de una radio a diario en el banco que llevaba los tanques de peces. Se encontró que la glucosa en sangre fue inusualmente alta y llegó a la conclusión de que el pescado se destacó por las vibraciones. Otro factor de estrés es el hacinamiento. El pescado debe mantenerse a una densidad que cumpla con las buenas prácticas de cría de peces. Para recomendaciones, consulte Brand et al. (2002) y Westerfield (1995). Hemos tenido buenos resultados en ayunas nuestros peces a una densidad de 10 a 12 peces en un tanque de 9 litros (con 3 capas de mármoles de tomar parte de ese volumen). La separación de los sexos puede causar estrés, por lo que se recomienda mantener una población de ambos sexos durante el ayuno. Esto significa que los huevos pueden ser puestos, y los huevos deben ser secuestrado para que no se comen. Una manera sencilla de capturar los huevos es para cubrir el fondo del tanque con 2-3 capas de canicas. La calidad del agua debe mantenerse mediante la eliminación de los huevos y los desechos y mediante la sustitución de alrededor del 10-15% del agua del tanque, todos los días. Para la eliminación de los huevos y los residuos, sifón funciona bien.

Pesaje: Al pesar los peces que no están anestesiados, se debe tener cuidado para reducir al mínimo la transferencia de agua de la red en el vaso, para garantizar la exactitud de pesaje. Si la red (con pescado) se transfirieron a las toallas de papel, la mayor parte del exceso de agua se puede quitar, y el peso se puede medir con precisión. Puede ser más fácil para anestesiar a los peces antes del pesaje, pero no hemos probado los posibles efectos de la anestesia un pescado dos veces en un día. Hemos probado nuestra técnica pesando los primeros peces con la red / secante método y volver a pesar el pescado después de haber sido anestesiado, y suavemente borrado en seco. No se encontraron diferencias significativas en el peso entre los métodos (p = 0,7927, t-test). Además, hemos probado si esta red / secante de glucosa en la sangre método afectadas, en comparación con la simple transferencia de los peces en el vaso tan pronto como se anotó (sin borrar). No se encontraron diferencias significativas en el nivel de glucosa en sangre entre los dos métodos de transferencia (P = 0,2241, t-test).

Anestesia: La anestesia química puede ser adecuado para muchos estudios. Aquí hemos demostrado anestesia agua fría como una alternativa, ya que anestésicos muchos (incluyendo tricaine/MS-222 (Brown, 1993)), elevar la glucosa en la sangre. En estudios anteriores, hemos determinado que el agua fría no elevan la glucosa en la sangre en el pez cebra (Eames et al., 2010).
Para la anestesia de agua fría, la temperatura debe reducirse lentamente. La tasa de disminución parece depender del tamaño de los peces, con peces más pequeños va en más rápido que los peces más grandes. Después de la inyección, se puede observar que el pescado se está recuperando muy lentamente de la anestesia (ver más abajo). Esto puede dar lugar, cuando sea la temperatura inicial es demasiado bajo, o cuando la temperatura se reduce demasiado rápido. La temperatura inicial es muy baja si la curva de pescado lateralmente al entrar en el agua. Si la temperatura inicial es correcta, los peces mantener su equilibrio inicial. Girará sus aletas pectorales a una posición horizontal, jadear y tener movimientos rápidos opérculo. Por lo general, se va a nadar. A medida que disminuye la temperatura, los movimientos se reducirá y el pescado pierda el equilibrio. Un plano quirúrgico de anestesia se alcanza cuando los peces se pueden manejar sin reaccionar. Para mantener a los peces bajo anestesia quirúrgica, los dedos deben estar fríos, por lo que mantenerlos en el agua antes de manipular el pescado. La esponja también deben mantenerse en frío a la misma temperatura que el agua utilizada para anestesiar a los peces. Es importante para saturar la esponja con agua que se sufficiently fría para mantener la anestesia una vez que el pescado se coloca en la misma.

Inyección: Antes de las inyecciones de empresa, es posible que desee analizar por lo menos un pescado para tener una idea del espesor de pared del cuerpo. Esto puede ayudarle a juzgar hasta qué punto la aguja tiene que insertar a entrar en la cavidad abdominal. Además, al insertar la aguja, se puede sentir la pared del cuerpo "dar" cuando la aguja entra en la cavidad abdominal. Durante la inyección, tomar medidas para mantener al paciente feliz. Asegúrese de que la esponja se satura con la temperatura del agua fría correcta para evitar que el pescado de reactivación durante la inyección. Una esponja muy suave y saturado es importante para minimizar los daños a las escalas y el moco que cubre de la piel. Una esponja bien saturada es también importante para mantener las branquias aireado. Le recomendamos la esponja de espuma se enumeran a continuación en Materiales. Finalmente, una vez que el pescado esté anestesiado, trabajar con rapidez para minimizar el tiempo que el pescado es bajo.

Recuperación: El pescado debe recuperarse de la anestesia prácticamente al entrar en el tanque de agua caliente. Si el pescado no comienzan a nadar inmediatamente, agitar suavemente el agua hacia sus branquias para acelerar la recuperación. Si la recuperación es lenta, entonces los peces se hundió muy rápido y se debe ajustar el procedimiento de anestesia adecuada. Las posibles causas de la lenta recuperación se discuten en La anestesia.