Kaposi의 육종 - 관련 Herpesvirus (KSHV)에 의해 유도된 유전자를 식별 Dysregulated
Summary
숙주 세포 요인은 설치 및 Kaposi의 육종 (KS)의 유지에 중요한 역할을한다. 우리는 KSHV에 감염된 DMVEC 전지 변경 숙주 세포 요소를 식별하는 방법을 설명하고, KS 종양 조직 인치 바이러스에 의해 변경 세포 유전자 소설 치료제에 대한 잠재적인 대상 (S) 역할을합니다.
Abstract
현재 KS 남부 아프리카에서 가장 지배 HIV / AIDS 관련 강한 악의이며, 따라서 세계. 1,2은 그것이 혈관 내피 세포의 angioproliferative 종양으로 특징이며, 흉막 유출의 lymphomas의 형태로 드문 B 세포 lymphoproliferative 질병 (화소)을 생산 그리고 multicentric 캐슬맨의 질병 중 일부 형태. KS에서 세포의 3-5만이 1~5% 적극적으로 Kaposi의 육종 – 관련 herpesvirus (KSHV), KS과 관련된 etiological 에이전트 lytic 복제를 지원하는 병변, 그리고 그것은 세포 요인해야한다는 분명하다 oncogenesis 및 종양 진행의 과정에서 바이러스 요인과 상호 작용. KS 병리에 기여 6,7 식별 소설 호스트 팩터 determinants은 물론, KS의 치료를위한 소설 치료제 개발을위한 같은 종양 진행과 전이에 대한 전조 마커를 개발하기 위해 필수적입니다 dysregulated 유전자 microarray 분석에 의해 확인되면 8. 함께 비디오 내용을 우리가 KSHV 감염 후 KS 종양 조직에서 피부 microvascular 내피 세포 (DMVEC)에 변경 숙주 세포의 유전자 발현 프로그램을 식별하는 데 사용하는 방법. 9, 단백질 표현의 변화입니다 immunoblot 및 이중 레이블 immunofluorescence에 의해 확인했다. dysregulated 유전자의 transcriptional 표현의 변경은 양적 실시간 중합 효소의 연쇄 반응 (PCR qRT -)에 의해 체외로 확인됩니다. 아카이브 KS 종양 조직을 이용하여 체외의 결과에 검증도 듀얼 표시 immunochemistry 및 조직 microarrays에 의해 수행됩니다. 8,10 접근은 체외에서 이후 생체내 모델 시스템의 개발을 위해 허용되는 KS 종양 조직 microenvironment에 dysregulated 유전자를 식별하기 위해 KS의 치료를위한 잠재적인 소설 치료의 발견 및 평가.
Protocol
Discussion
이 보고서에 사용된 방법론은 실험 설정의 다양한 수행할 수 있습니다. 그들은 특별한 장비 또는 핵심 시설에 대한 액세스를 필요로합니다. biosaftey 수준 3 (BSL – 3) 시설의 사용을 요구할 수 있습니다 KSHV와 같은 전염성 바이러스성 병원체를 포함한 실험을 수행할 때 적절한주의가 이동해야합니다. 조직 인수도 해당 기관 검토 보드 (IRBs)에 의해 승인을 받아야합니다.
이러한 ?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는 그의 조언이 원고의 검토를 위해 제임스 EK 힐드레스, 메해리 의료 대학, 감사합니다. 우리는 또한 원고의 편집 다이아나 Marver 감사합니다. 에이즈 건강 불균형 연구 센터, NIH 그랜트 5U54 RR019192 – 05,, 임상 연구 메해리 센터, NIH 그랜트 P20RR011792,이 작품은 에이즈 연구 메해리 밴더빌트 센터 (NIH 그랜트 P30 AI054999 – 05)에 의해 지원되었으며 NIH에 의해 부여 P01 CA113239. DJA는 부분적으로 에이즈 연구 밴더빌트 – 메해리 센터 (CFAR) 및 임상 연구에 대한 메해리 센터 (CRC)에서 파일럿 부여에 의해 투자되었다.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| RPMI 1640 | Invitrogen | 05-0001DJ | ||
| TPA | Sigma | P1585 | ||
| PBS pH 7.4 | Invitrogen | 10010-023 | ||
| Sodium butyrate | Sigma | 19364 (FLUKA) | ||
| EBM-2 media | Lonza | CC-3156 | + bullet kits supplement | |
| DMVEC cells (HMVEC) | Lonza | CC2543 | ||
| Fetal calf serum | Hyclone | SH30066.03 | ||
| Penicillin/streptomycin | Invitrogen | 15140-122 | ||
| Chamber slides | Nalgene | 154461 | ||
| KSHV LANA Mab | Vector Labs | VP-H913 | 1:50 dilution/IFA | |
| Galectin-3 goat pAb | R&D Systems | AF1154 | ||
| Donkey-anti-goat FITC | Jackson ImmunoRessearch | 705-095-1 | ||
| Donkey-anti-goat Rho | Jackson ImmunoRessearch | 705-295-003 | 1:100 dilution/IFA | |
| Mounting media | Vector Labs | H 1500 | Vectashield with DAPI | |
| BCA Protein Assay Kit | Pierce | 23235 | ||
| Nitrocellulose | Bio-Rad | 161-0112 | ||
| Donkey-anti-goat-conj. | Santa Cruz | SC 2020 | ||
| Western substrate | Pierce | 34075 | ||
| Biotin-rabbit-anti goat | DAKO | 305-065-045 | ||
| AP-Strepavidin conj. | DAKO | K 0492 (kit) | ||
| RNase DNase Free Set | Qiagen | 79254 | ||
| MJ Mini Cycler | Bio-Rad | PTC-1148C | ||
| Bio-Photometer | Eppendorf | 952000006 | ||
| RC 6 Plus Centrifuge | Sorvall | 46910 | ||
| Coulter Optima L-90K Ultracentrifuge | Beckman | 392052 | ||
| MYiQ iCycler Real Time PCR Detection System | Bio-Rad | 170-9770 | ||
| TE 2000S Fluorescent microscope | NIKON | TE2000S | ||
| 2100 Bioanalyzer | Agilent | G2938C | ||
| Eclipse E 200 | NIKON | E 200 | ||
| Sorvall Legend RT Centrifuge | Thermo | 75004377 |
Referências
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