マウス尿路感染症の経尿道的誘導
Summary
このビデオでは、経尿道的にマウスの尿路感染症を誘発し、結果として感染症の程度を定量化する方法を紹介します。
Abstract
興味の尿路病原性菌株は、寒天上で増殖されています。一般的に、尿路疾患<em> E.大腸菌</em>（UPEC）と他の株は37℃ルリア – ベルターニ（LB）寒天培地上で一晩成長させることができる·周囲空気中のC。 UPECの菌株は、LB寒天培地上で黄色がかった白色半透明のコロニーとして成長する。適切なコロニー形態の確認後、シングルコロニーを培養液で培養されるに応じて選択されます。 LBブロスは、ほとんどの尿路病原性菌株に使用することができます。二つのシリアル、一晩LBブロス培養物はI型線毛、尿路病原性の細菌のための明確に定義された毒性因子の発現を増強するために用いることができる。ブロス培養物（PBS）リン酸緩衝生理食塩水で所望の濃度に希釈されています。 8〜12週齢の雌マウスは、イソフルラン麻酔下に置き、経尿道的にポリエチレンチューブで覆われた30ゲージのシリンジを使用して細菌を接種されています。経験的にそれぞれの細菌/マウス系統の組み合わせのために決定しなければならない典型的な接種は、10です。<sup> 6</sup> 10〜<sup> 8</sup> CFU PBSの10〜50マイクロリットルのマウスあたり。希望の感染期間（数週間に一日）、尿サンプルと膀胱と両方の腎臓が収穫された後。各臓器は、細かく刻むPBSに入れ、そしてブルーブレットホモジナイザーで均質化する。尿および組織ホモジネートが直列にPBSで希釈し、適切な寒天上で培養されています。翌日は、コロニー形成単位がカウントされます。
Protocol
尿道カテーテルのI.準備各マウスの膀胱及びサンプリングする腎臓の場合は、それぞれ1クライオバイアルチューブ5-6ステンレススチール製ビーズ（膀胱、1.6 mmのサイズまたは0.9〜2.0ミリメートルのブレンド）または酸化ジルコニウムビーズ（腎臓、0.5mmのサイズ）を配置。ビーズを含むチューブをオートクレーブ。 周囲温度に冷却管の後、各ステンレススチールビーズを含むチ…
Discussion
細菌の経尿道的接種によるマウス尿路感染症の誘導は、老舗が技術的な要求手順11です。ハングとHultgrenは最近、マウス尿路感染症13の経尿道的技術の優れたレビューを発表した。本稿では、さらにこの実験的なアプローチの細かい点を説明しよう。
初心者は、膀胱を公開する正中開腹術を行うインドインク（PBS中の1％）の希釈溶液を注入し、膀胱の青色…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
著者は彼らの専門的な技術支援のためにシェリー謝とジェニファーペインに感謝します。この作業は小児泌尿器科とスタンフォード小児研究基金協会からの助成金を戴いています。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Cryovial tubes, 2.0 ml polypropylene (no caps) | E&K Scientific | 640201 | ||
| Caps for cryovial tubes, with ‘O’ ring | E&K Scientific | 440011-N | ||
| Bullet Blender | Next Advance | BBX24 | ||
| Zirconium Oxide Beads (0.5mm) | Next Advance | ZROB05 | ||
| Stainless Steel Beads (1.6mm) | Next Advance | SSB16 | ||
| Stainless Steel Bead Blend (0.9-2.0mm) | Next Advance | SSB14B | ||
| CBA/J Mice, 8-12 week old female | Jackson Laboratories | 000656 | ||
| Phosphate Buffered Saline (NaCl 137mM, KCl 2.7mM, Na2HPO4 4.3mM, KH2PO4 1.4mM) | EMD | EM-SX0420-13 (NaCl) EM-PX1405-1 (KCl) EM1.06585.0 (Na2HPO4) EM-5108-1 (KH2PO4) | ||
| LB agar | ||||
| LB broth | EMD | 1.10285.0500 | ||
| Isoflurane (Aerrane) | Baxter | NDC 10019-773-60 | ||
| Inoculating loops | Fisher Scientific | 22-363-601 | ||
| Eosin-methylene blue (EMB) agar powder | Himedia Laboratories | MM022-500G | ||
| MacConkey agar powder | Difco | 212123 | ||
| LB agar powder | Difco | 244520 | ||
| Intramedic non-radiopaque polyethylene tubing, PE10 [inner dimension 0.28 mm (0.011 inch); outer dimension 0.61 mm (0.024 inch)] | BD Biosciences | 427401 | ||
| 30 gauge needles, 1/2 inch | BD Biosciences | 305106 | ||
| 1 ml tuberculin Slip-Tip syringe | BD Biosciences | 309602 | ||
| 3 ml Luer-Lock syringe | BD Biosciences | 309585 |
Referências
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Citar este artigo
Thai, K. H., Thathireddy, A., Hsieh, M. H. Transurethral Induction of Mouse Urinary Tract Infection. J. Vis. Exp. (42), e2070, doi:10.3791/2070 (2010).