Kronisk Imaging av Mouse syncentrum Använda en uttunnade skallen Förberedelser
Summary
I den här videon och kompletterande material, visar vi ett protokoll för kronisk<em> In vivo</em> Avbildning av den intakta hjärnan med en förtunnad-skalle beredning.
Abstract
In vivo-avbildning med två-photon mikroskopi laserskanning (2PLSM) möjliggör studier av levande celler och neuronala processer i den intakta hjärnan. Tekniken som presenteras här tillåter avbildning av samma område i hjärnan vid flera olika tidpunkter (kronisk imaging) med mikroskopiska upplösning möjliggör spårning av Dendritutskotten som är de små strukturer som representerar majoriteten av postsynaptiska excitatoriska platser i CNS. Förmågan att tydligt lösa fina kortikala strukturer under flera tidpunkter har många fördelar, speciellt i studiet av hjärnans plasticitet i vilka morfologiska förändringar i synapser och krets remodeling kan hjälpa till att förklara bakomliggande mekanismer. I denna video och kompletterande material, visar vi ett protokoll för kronisk in vivo avbildning av den intakta hjärnan med en förtunnad-skalle beredning. Den tunnas-skalle preparat är en minimalinvasiv metod, som undviker potentiella skador på duran och / eller cortex, vilket minskar uppkomsten av en inflammatorisk reaktion. När protokollet utförs korrekt är det möjligt att klart övervaka förändringar i dendritiska ryggraden egenskaper i den intakta hjärnan under en längre tid.
Protocol
Discussion
Kronisk avbildning med två-photon mikroskopi blir en allt populärare metod för att studera morfologiska förändringar utlöses under plasticitet 2-5. Här visar vi ett förtunnas-skalle förberedelse till identifierade Dendritutskotten i den intakta musen hjärnan på olika imaging dagar. I detta protokoll, skall skallen lämnas intakt, vilket orsakar minimal skada på hjärnbarken och resulterar i mycket låga halter av neuroinflammation som kan förändra hjärnans funktion 6. Detta gör att …
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Detta arbete stöddes av Burroughs Wellcome Karriär Award i biomedicin (AKM), The Whitehall Stiftelsen Forskning Grant (AKM), Sloan Foundation Fellowship (AKM), NIH EY019277 (AKM), och ett NEI finansierat, Vision Training Grant, EY013319 ( EAK).
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Fentanyl Citrate | In-house pharmacy | Fentanyl Cocktail: Anesthesic Cocktail; IP Dose: 0.0125 ml/g Final cocktail conc.: 0.05 mg/kg |
||
| Medetomindine Hydrochloride | In-house pharmacy | Fentanyl Cocktail: Anesthesic Cocktail; IP Dose: 0.0125 ml/g Final cocktail conc.: 0.05 mg/kg |
||
| Midazolam HCL | In-house pharmacy | Fentanyl Cocktail: Anesthesic Cocktail; IP Dose: 0.0125 ml/g Final cocktail conc.: 0.05 mg/kg |
||
| 2,2,2-tribromoethanol | Avertin Cocktail: Anesthetic; IP Dose: 0.0075 cc/ g Final cocktail conc.: 1% |
|||
| 2-methyl-2-butanol (Final concentration: 0.775%) | Avertin Cocktail: Anesthetic; IP Dose: 0.0075 cc/ g Final cocktail conc.: .775% |
|||
| TC-1000 Temp. Control System for Mice | CWE, Inc. | TC-1000 Mouse | Body Temp. Regulation | |
| Toberadex | In-house pharmacy | Eye Ointment | ||
| 10% Ferric Chloride | Ricca Chemical, Inc. | 3120-32 | Thin-skull preparation | |
| Microsurgical Blade | Sable Industries | S-6400 | Thin-skull preparation | |
| Cyanoacrylate 404,401 | Loctite | P/N 46551 | Thin-skull preparation | |
| Cyanoacrylate 401 | Loctite | P/N 40140 | Thin-skull preparation | |
| Zip Kicker Glue Accelerator | Pacer Technology | PT-29 | Thin-skull preparation | |
| Micro Drill Steel Burrs 0.7mm tip diameter | Fine Science Tools | 19008-07 | Thin-skull preparation | |
| Microtorque Control Box and Tech2000 Handpiece | Ram Products, Inc. | TECH2000ON/OFF | Thin-skull preparation | |
| #6-0 (0.7 metric ) silk suture | Ethicon | K8894H | Taper C-1 | |
| Eye Dressing Forceps, 10cm, tip width 0.5mm, curved | Surgical Tools | Fine Science Tools | 11152-10 | |
| Extra Fine Bonn Scissors, 8.5cm, straight tip, cutting edge 13mm | Surgical Tools | Fine Science Tools | 14084-08 | |
| Standard Pattern Forceps, straight, 2.5mmx1.35mmtip, 12cm | Surgical Tools | Fine Science Tools | 11000-12 |
Referências
- Feng, G. Imaging neuronal subsets in transgenic mice expressing multiple spectral variants of GFP. Neuron. 28 (1), 41-51 (2000).
- Holtmaat, A. high-resolution imaging in the mouse neocortex through a chronic cranial window. Nat Protoc. 4 (8), 1128-1144 (2009).
- Majewska, A. K., Newton, J. R., Sur, M. Remodeling of synaptic structure in sensory cortical areas in vivo. J Neurosci. 26 (11), 3021-3029 (2006).
- Mostany, R., Portera-Cailliau, C. A Craniotomy Surgery Procedure for Chronic Brain Imaging. J Vis Exp. , (2008).
- Yang, G. Thinned-skull cranial window technique for long-term imaging of the cortex in live mice. Nat Protocols. 5 (2), 201-208 (2010).
- Xu, H. T. Choice of cranial window type for in vivo imaging affects dendritic spine turnover in the cortex. Nat Neurosci. 10 (5), 549-551 (2007).
