Хронический изображений Мыши зрительной коры Использование тоньше черепа-подготовка
Summary
В этом материале видео и дополнительные, мы показываем протокол для хронических<em> В естественных условиях</em> Визуализации нетронутыми мозга с помощью разбавленной-череп подготовки.
Abstract
В естественных изображений с помощью двух-фотонной микроскопии лазерного сканирования (2PLSM) позволяет изучения живых клеток и нейронов процессов в интактном мозге. Техники, представленные здесь позволяет изображений одного и того же область мозга, в нескольких точках времени (хронический изображений) с микроскопическими разрешение позволяет отслеживания дендритных шипиков, которые являются мелкими структурами, которые представляют большинство возбуждающих постсинаптических сайтов в ЦНС. Способность четко решать штраф корковых структур в течение нескольких моментов времени имеет много преимуществ, в частности, в изучении пластичности мозга, в которых морфологические изменения в синапсах и схема реконструкции может помочь объяснить основные механизмы. В этом материале видео и дополнительные, мы показываем протокол для хронических в естественных изображений нетронутыми мозга с помощью разбавленной-череп подготовки. В разреженных черепа препарата минимально инвазивных подход, который позволяет избежать потенциального повреждения твердой мозговой оболочки и / или коры, снижая тем самым начало воспалительного ответа. При этом протокол выполняется правильно, то можно четко отслеживать изменения в характеристики дендритных позвоночника в интактном мозге в течение длительного периода времени.
Protocol
Discussion
Хронический визуализации с использованием двухфотонного микроскопии становится все более популярной техникой для изучения морфологических изменений, вызванных в течение 2-5 пластичности. Здесь мы показываем, в разреженных черепа подготовки следовать определены дендритных шип…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Эта работа была поддержана Burroughs Wellcome Карьера премии в области медико-биологических наук (АКМ), Уайтхолл исследовательского фонда Грант (АКМ), Слоан стипендии Фонда (АКМ), NIH EY019277 (АКМ) и НОУ финансируется, Видение Обучение Грант, EY013319 ( ЕАК).
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Fentanyl Citrate | In-house pharmacy | Fentanyl Cocktail: Anesthesic Cocktail; IP Dose: 0.0125 ml/g Final cocktail conc.: 0.05 mg/kg |
||
| Medetomindine Hydrochloride | In-house pharmacy | Fentanyl Cocktail: Anesthesic Cocktail; IP Dose: 0.0125 ml/g Final cocktail conc.: 0.05 mg/kg |
||
| Midazolam HCL | In-house pharmacy | Fentanyl Cocktail: Anesthesic Cocktail; IP Dose: 0.0125 ml/g Final cocktail conc.: 0.05 mg/kg |
||
| 2,2,2-tribromoethanol | Avertin Cocktail: Anesthetic; IP Dose: 0.0075 cc/ g Final cocktail conc.: 1% |
|||
| 2-methyl-2-butanol (Final concentration: 0.775%) | Avertin Cocktail: Anesthetic; IP Dose: 0.0075 cc/ g Final cocktail conc.: .775% |
|||
| TC-1000 Temp. Control System for Mice | CWE, Inc. | TC-1000 Mouse | Body Temp. Regulation | |
| Toberadex | In-house pharmacy | Eye Ointment | ||
| 10% Ferric Chloride | Ricca Chemical, Inc. | 3120-32 | Thin-skull preparation | |
| Microsurgical Blade | Sable Industries | S-6400 | Thin-skull preparation | |
| Cyanoacrylate 404,401 | Loctite | P/N 46551 | Thin-skull preparation | |
| Cyanoacrylate 401 | Loctite | P/N 40140 | Thin-skull preparation | |
| Zip Kicker Glue Accelerator | Pacer Technology | PT-29 | Thin-skull preparation | |
| Micro Drill Steel Burrs 0.7mm tip diameter | Fine Science Tools | 19008-07 | Thin-skull preparation | |
| Microtorque Control Box and Tech2000 Handpiece | Ram Products, Inc. | TECH2000ON/OFF | Thin-skull preparation | |
| #6-0 (0.7 metric ) silk suture | Ethicon | K8894H | Taper C-1 | |
| Eye Dressing Forceps, 10cm, tip width 0.5mm, curved | Surgical Tools | Fine Science Tools | 11152-10 | |
| Extra Fine Bonn Scissors, 8.5cm, straight tip, cutting edge 13mm | Surgical Tools | Fine Science Tools | 14084-08 | |
| Standard Pattern Forceps, straight, 2.5mmx1.35mmtip, 12cm | Surgical Tools | Fine Science Tools | 11000-12 |
Referências
- Feng, G. Imaging neuronal subsets in transgenic mice expressing multiple spectral variants of GFP. Neuron. 28 (1), 41-51 (2000).
- Holtmaat, A. high-resolution imaging in the mouse neocortex through a chronic cranial window. Nat Protoc. 4 (8), 1128-1144 (2009).
- Majewska, A. K., Newton, J. R., Sur, M. Remodeling of synaptic structure in sensory cortical areas in vivo. J Neurosci. 26 (11), 3021-3029 (2006).
- Mostany, R., Portera-Cailliau, C. A Craniotomy Surgery Procedure for Chronic Brain Imaging. J Vis Exp. , (2008).
- Yang, G. Thinned-skull cranial window technique for long-term imaging of the cortex in live mice. Nat Protocols. 5 (2), 201-208 (2010).
- Xu, H. T. Choice of cranial window type for in vivo imaging affects dendritic spine turnover in the cortex. Nat Neurosci. 10 (5), 549-551 (2007).
