비교적 생체내에 학습 Xenopus laevis</em
Summary
개구리<em> Xenopus laevis</em> 항원에 특정한 CD8 T 세포 응답을 촉진하기 위해 gp96로 열 충격 단백질의 기능을 탐험에 대한 매력적인 대안이 아닌 포유 동물 모델을 제공합니다. 우리는 방법을 연구 제시<em> 생체내에</emgp96로 피부 종양 항원의 교차 프레 젠 테이션> 촉진.
Abstract
우리는 수륙 양용 Xenopus의 개발은 chaperoned 항원의 교차 프레 젠 테이션을 촉진하고 타고난 및 적응 T 세포 반응을 이끌어내는 수 있습니다. Xenopus 피부 이식 거부와 같은 gp96와 같은 특정 열 충격 단백질 (hsps)의 능력을 연구하기위한 독특한 아닌 포유 동물 모델을 laevis 고전 MHC 클래스 구이 (클래스 구이) 제한 T 세포 반응을 이끌어내는 위해 gp96의 능력을 연구하는 뛰어난 플랫폼을 제공합니다. 또한, Xenopus 모델 시스템은 또한함으로써 면역 감시를 탈출 자신의 클래스 구이 분자를 아래로 조절이 종양에 대한 응답을 생성하는 gp96의 능력을 탐험 마우스에 대한 매력적인 대안을 제공합니다. 최근, 우리는 항원 제시 세포 (APCs)로 복막 leukocytes를 사용하여 Xenopus 클론에서 입양 세포 전송 분석을 개발하고, 같이 가지고 가벼운 histocompatibility 피부 항원에 대한뿐만 아니라 Xenopus thymic 종양 15에 대한 생체내에 gp96 수있는 최고급 CD8 T 세포 응답 클래스 구이 분자를 표현하지 않습니다 / 0. 우리는 여기서 복막 leukocytes의 이끌어 냄, pulsing과 입양 전송뿐만 아니라 피부 이식 및 종양 이식 assays 포함하여 이러한 assays을 수행하기 위해 관련된 방법론을 설명합니다. 또한 우리는 유동세포계측법 피부 제거 및 안티 종양 반응에 관여 효과기 인구의 자세한 특성화를 허용 확산 assays에 사용되는 주변 혈액 leukocytes의 수확과 분리를 설명하고 있습니다.
Protocol
Discussion
수륙 양용 Xenopus은 면역력을 공부하는 독특한 다목적 아닌 포유 동물 모델입니다. 생명 의학 및 면역 연구에 광범위한 사용에는 MHC 정의 클론 LG – 6와 LG – 15뿐만 아니라 다른 세포 라인과 단클론 항체와 같은 많은 중요한 연구 도구가 생긴 거죠. 우리가 강력한 AG – 특정 안티 – 사소한 H – AG 및 안티 종양 T 세포 응답 7 중재하기 위해 gp96로 열 충격 단백질의 기능 연구를 체외에서 생…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
티나 마틴과 데이비드 올브 라이트에서 제공하는 전문가 동물 축산은 기꺼이 감사합니다. 이 연구는 NIH에서 교부금 T32 – AI – 07285 (HN), NIH R25 2GM064133 (TCL), 1R03 – HD061671 – 01, R24 – AI – 059830-06에 의해 지원되었다.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Reagents needed: | ||||
| Amphibian Phosphate Buffered Saline (APBS): | ||||
| NaCl, 1.15 g/L | ||||
| Na2HPO4, 0.2 g/L | ||||
| KH2PO | ||||
| 10N NaOH | ||||
| Tricaine Methane Sulfonate (TMS, MS-222) | Crescent Research Chemicals | CAS#886-86-2 | ||
| Sodium bicarbonate | Fisher Scientific | S-233-500 | ||
| Histopaque-1077 | Sigma-Aldrich | 10771 | 100ml | |
| Heparin Sodium Salt | Sigma-Aldrich | H3149-50KU | ||
| Culture medium for Xenopus 15/0 tumors [see 3 for more details]: | ||||
| Iscove DMEM basal medium | Gibco-Invitrogen | 11965 | ||
| Insulin | ||||
| Non-essential amino acids | ||||
| Penicillin-streptomycin | ||||
| Kanamycin | ||||
| Primatone | Sheffield Products Division | |||
| β2-mercaptoethanol | ||||
| NaHCO3 | ||||
| 30% double distilled water | ||||
| 5% featal bovine serum | ||||
| 20% superantant from a Xenopus kidney cell line A6 | ||||
| 0.25% of normal Xenopus serum | ||||
| Materials and Equipment: | ||||
| 50 and 15 ml conical centrifuge tubes (sterile) | ||||
| 25 gauge 5/8 Precision Glide sterile needles | BD | |||
| 18 gauge 1½ Precision Glide sterile needles | BD | |||
| 1 ml Tuberculin Slip Tip Syringe sterile | BD | |||
| 10 ml Slip Tip Syringe sterile | BD | |||
| 1.5 ml MicroCentrifuge tubes (sterile) | ||||
| 60 X 15 mm Polystyrene Petri Dishes sterile | Falcon | |||
| Razor blades | ||||
| 25 X 75 mm X 1 mm Premium Microscope Slides | Fisher Scientific | |||
| 10 cm glass petri dishes | ||||
| 9″ Pasteur Pipetes Durex Borosilicate Glass Cotton Plugged Disposable | VWR | |||
| Tygon tubing | ||||
| Two # 5 Swiss Jeweler’s Forceps | Miltex Inc. | |||
| Micro Dissecting Spring Scissors McPherson-Vannas straight cutting edge 6 mm | Roboz | |||
| Helios calipers | ||||
| Dissecting microscope | ||||
| High intensity illuminator | ||||
| Hemacytometer | ||||
| Un-bunsen burner | ||||
| 37°C shaking incubator | ||||
| Centrifuge |
Referências
- Kobel, H. R., Pasquier, D. u., L, . Hyperdiploid species hybrids for gene mapping in Xenopus. Nature. 279, 157-158 (1979).
- Robert, J., Menoret, A., Basu, S., Cohen, N., Srivastava, P. R. Phylogenetic conservation of the molecular and immunological properties of the chaperones gp96 and hsp70. Eur J Immunol. 31, 186-195 (2001).
- Robert, J., Gantress, J., Cohen, N., Maniero, G. D. Xenopus as an experimental model for studying evolution of hsp–immune system interactions. Methods. 32, 42-53 (2004).
- Chardonnens, X., Pasquier, D. u., L, . Induction of skin allograft tolerance during metamorphosis of the toad Xenopus laevis: a possible model for studying generation of self tolerance to histocompatibility antigens. Eur J Immunol. 3, 569-573 (1973).
- Du Pasquier, L., Bernard, C. C. Active suppression of the allogeneic histocompatibility reactions during the metamorphosis of the clawed toad Xenopus. Differentiation. 16, 1-7 (1980).
- Ramanayake, T., Simon, D. A., Frelinger, J. G., Lord, E. M., Robert, J. In vivo study of T-cell responses to skin alloantigens in Xenopus using a novel whole-mount immunohistology method. Transplantation. 83, 159-166 (2007).
- Robert, J., Ramanayake, T., Maniero, G. D., Morales, H., Chida, A. S., S, A. Phylogenetic conservation of glycoprotein 96 ability to interact with CD91 and facilitate antigen cross-presentation. J Immunol. 180, 3176-3182 (2008).
- Robert, J., Gantress, J., Rau, L., Bell, A., Cohen, N. Minor histocompatibility antigen-specific MHC-restricted CD8 T cell responses elicited by heat shock proteins. J Immunol. 168, 1697-1703 (2002).
- Morales, H., Robert, J. In vivo and in vitro techniques for comparative study of antiviral T-cell responses in the amphibian Xenopus. Biol Proced Online. 10, 1-8 (2008).
- Maniero, G. D., Robert, J. Phylogenetic conservation of gp96-mediated antigen-specific cellular immunity: new evidence from adoptive cell transfer in xenopus. Transplantation. 78, 1415-1421 (2004).
