Mekanisk dissociation: En metod för att erhålla livskraftiga celler från en vävnad
Published: April 30, 2023
Abstract
Källa: Garaud et. al., Ett enkelt och snabbt protokoll till icke-enzymatiskt dissociera färska mänskliga vävnader för analys av infiltrerande lymfocyter. J. Vis. Exp. (2014).
Denna video beskriver icke-enzymatiska dissociation av färsk mänsklig vävnad för att erhålla livskraftiga celler. Tekniken används för kvalitativ och kvantitativ analys av CD45 positiva celler (lymfocyter/leukocyter) finns i olika normala och maligna mänskliga vävnader.
Protocol
1. Beredning av vävnadshom homogenatet Dissekera resected vävnader (maligna och normala vävnad resected från operationssalen) är i patologi lab av utbildad personal för omedelbar upphämtning. Tumör, NANT (tas längst bort från tumören som möjligt) och normala vävnad fragment behandlas rutinmässigt inom 1- 3 timmar av kirurgiska excision i ett BSL2 laboratorium med standard biosäkerhet förfaranden för mänskliga vävnader. Ett flödesschema för protokollet illustreras i figur 1….
Representative Results
Figur 1: Protokollflödesschema. Vårt förfarande för bearbetning av färska mänskliga vävnader och vissa analytiska metoder som senare kan användas för att bedöma lymfocyter infiltrera mänskliga vävnader visas. Figur 2: H&E-färgad bild av ett brösttumörvävnadsavtryck. Detta avtry…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Materials
| GentleMacs Dissociator | Miltenyi Biotec | 130-093-235 | BD Medimachine is somewhat equivalent |
| Centrifuge 5810 R | Eppendorf | or other standard table top centrifuge | |
| Centrifuge 5417 R | Eppendorf | or other standard microcentrifuge | |
| Esco Class II A2 Biosafety Cabinet | ESCO global | or other standard BSL2 hood | |
| Inverted Microscope | Nikon eclipse TS100 | or other microscope compatible for a hemacytometer | |
| Bürker Chamber Marienfield | 640210 | or other standard hemacytometer | |
| Navios Flow Cytometer | Beckman Coulter | or other flow cytometer (8-10 color recommended) | |
| GentleMacs C-Tube | Miltenyi Biotec | 130-096-344 | BD Medimachine uses Filcon |
| Cell Culture Dish | Sarstedt | 72,710 | or other non-pyrogenic plasticware |
| Disposable Scalpel | Swann-Morton | 510 | or standard single use sterile scalpel |
| BD Cell Strainer 40 µm | Becton Dickinson | 734-0002 | or other non-pyrogenic plasticware |
| BD Falcon Tube 50 ml | Becton Dickinson | 352070 | or other non-pyrogenic plasticware |
| BD Falcon Tube 15 ml | Becton Dickinson | 352097 | or other non-pyrogenic plasticware |
| BD FACS Tube 5 ml | Becton Dickinson | 352008 | or other non-pyrogenic plasticware |
| Sterile Pasteur Pipette 5 ml | VWR | 612-1685 | or other non-pyrogenic plasticware |
| Microfuge Tube 1.5 ml | Eppendorf | 7805-00 | or other non-pyrogenic plasticware |
| X-Vivo 20 | Lonza | BE04-448Q | serum-free medium recommended |
| Phosphate buffered saline | Lonza | BE17-516F | standard physiological PBS |
| Trypan blue | VWR | 17942E | or other vital stain |
Citar este artigo
Mechanical Dissociation: A Method to Obtain Viable Cells from a Tissue. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20225, doi: (2023).