Mekanisk dissosiasjon: En metode for å skaffe levedyktige celler fra et vev
Published: April 30, 2023
Abstract
Kilde: Garaud et. al., A Simple and Rapid Protocol to Non-enzymatically Dissociate Fresh Human Tissues for analyse av infiltrerende lymfocytter. J. Vis. Uttr. (2014).
Denne videoen beskriver den ikke-enzymatiske dissosiasjonen av friskt menneskelig vev for å oppnå levedyktige celler. Teknikken brukes til kvalitativ og kvantitativ analyse av CD45 positive celler (lymfocytter/leukocytter) tilstede i ulike normale og ondartede menneskelige vev.
Protocol
1. Forberedelse av vevet homogenat Dissekerte resected vev (ondartet og normalt vev resected fra operasjonsrommet) er i patologi lab av opplært personell for umiddelbar henting. Tumor, NANT (tatt lengst avstand fra svulsten som mulig) og normale vevsfragmenter behandles rutinemessig innen 1 – 3 timer kirurgisk eksisjon i et BSL2-laboratorium ved hjelp av standard biosikkerhetsprosedyrer for humant vev. Et flytskjema for protokollen er illustrert i figur 1. Vei alle vevsfragmenter (no…
Representative Results
Figur 1: Protokollflytskjema. Vår prosedyre for behandling av friskt humant vev og noen analytiske tilnærminger som senere kan brukes til å vurdere lymfocytter som infiltrerer menneskelig vev, vises. Figur 2: H&E farget bilde av et brystsvulstvevsavtrykk. Dette avtrykket, tatt fra et friskt…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Materials
| GentleMacs Dissociator | Miltenyi Biotec | 130-093-235 | BD Medimachine is somewhat equivalent |
| Centrifuge 5810 R | Eppendorf | or other standard table top centrifuge | |
| Centrifuge 5417 R | Eppendorf | or other standard microcentrifuge | |
| Esco Class II A2 Biosafety Cabinet | ESCO global | or other standard BSL2 hood | |
| Inverted Microscope | Nikon eclipse TS100 | or other microscope compatible for a hemacytometer | |
| Bürker Chamber Marienfield | 640210 | or other standard hemacytometer | |
| Navios Flow Cytometer | Beckman Coulter | or other flow cytometer (8-10 color recommended) | |
| GentleMacs C-Tube | Miltenyi Biotec | 130-096-344 | BD Medimachine uses Filcon |
| Cell Culture Dish | Sarstedt | 72,710 | or other non-pyrogenic plasticware |
| Disposable Scalpel | Swann-Morton | 510 | or standard single use sterile scalpel |
| BD Cell Strainer 40 µm | Becton Dickinson | 734-0002 | or other non-pyrogenic plasticware |
| BD Falcon Tube 50 ml | Becton Dickinson | 352070 | or other non-pyrogenic plasticware |
| BD Falcon Tube 15 ml | Becton Dickinson | 352097 | or other non-pyrogenic plasticware |
| BD FACS Tube 5 ml | Becton Dickinson | 352008 | or other non-pyrogenic plasticware |
| Sterile Pasteur Pipette 5 ml | VWR | 612-1685 | or other non-pyrogenic plasticware |
| Microfuge Tube 1.5 ml | Eppendorf | 7805-00 | or other non-pyrogenic plasticware |
| X-Vivo 20 | Lonza | BE04-448Q | serum-free medium recommended |
| Phosphate buffered saline | Lonza | BE17-516F | standard physiological PBS |
| Trypan blue | VWR | 17942E | or other vital stain |
Citar este artigo
Mechanical Dissociation: A Method to Obtain Viable Cells from a Tissue. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20225, doi: (2023).