דיסוציאציה מכנית: שיטה להשגת תאים בני קיימא מרקמה
Published: April 30, 2023
Abstract
מקור: Garaud et. al., פרוטוקול פשוט ומהיר לניתוק לא אנזימטי של רקמות אנושיות טריות לניתוח לימפוציטים חודרים. י. ויס אקספ (2014).
סרטון זה מתאר את הניתוק הלא אנזימטי של רקמה אנושית טרייה כדי להשיג תאים בני קיימא. הטכניקה משמשת לניתוח איכותי כמותי של תאים חיוביים CD45 (לימפוציטים / לויקוציטים) הנמצאים ברקמות אנושיות נורמליות וממאירות שונות.
Protocol
1. הכנת הרקמה הומוגנטית ניתוח רקמות מנוכות (רקמות ממאירות ונורמליות שהושלכו מחדר הניתוח) נמצאות במעבדה הפתולוגית על ידי כוח אדם מיומן לאיסוף מיידי. גידול, NANT (נלקח את המרחק הרחוק ביותר מן הגידול ככל האפשר) שברי רקמות נורמלי מעובדים באופן שגרתי בתוך 1 – 3 שעות של כריתה כירורגית במעבדה BSL2 ?…
Representative Results
איור 1: תרשים זרימת פרוטוקול. ההליך שלנו לעיבוד רקמות אנושיות טריות וכמה גישות אנליטיות שניתן להשתמש בהן לאחר מכן כדי להעריך לימפוציטים החודרים לרקמות אנושיות מוצגים. …
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Materials
| GentleMacs Dissociator | Miltenyi Biotec | 130-093-235 | BD Medimachine is somewhat equivalent |
| Centrifuge 5810 R | Eppendorf | or other standard table top centrifuge | |
| Centrifuge 5417 R | Eppendorf | or other standard microcentrifuge | |
| Esco Class II A2 Biosafety Cabinet | ESCO global | or other standard BSL2 hood | |
| Inverted Microscope | Nikon eclipse TS100 | or other microscope compatible for a hemacytometer | |
| Bürker Chamber Marienfield | 640210 | or other standard hemacytometer | |
| Navios Flow Cytometer | Beckman Coulter | or other flow cytometer (8-10 color recommended) | |
| GentleMacs C-Tube | Miltenyi Biotec | 130-096-344 | BD Medimachine uses Filcon |
| Cell Culture Dish | Sarstedt | 72,710 | or other non-pyrogenic plasticware |
| Disposable Scalpel | Swann-Morton | 510 | or standard single use sterile scalpel |
| BD Cell Strainer 40 µm | Becton Dickinson | 734-0002 | or other non-pyrogenic plasticware |
| BD Falcon Tube 50 ml | Becton Dickinson | 352070 | or other non-pyrogenic plasticware |
| BD Falcon Tube 15 ml | Becton Dickinson | 352097 | or other non-pyrogenic plasticware |
| BD FACS Tube 5 ml | Becton Dickinson | 352008 | or other non-pyrogenic plasticware |
| Sterile Pasteur Pipette 5 ml | VWR | 612-1685 | or other non-pyrogenic plasticware |
| Microfuge Tube 1.5 ml | Eppendorf | 7805-00 | or other non-pyrogenic plasticware |
| X-Vivo 20 | Lonza | BE04-448Q | serum-free medium recommended |
| Phosphate buffered saline | Lonza | BE17-516F | standard physiological PBS |
| Trypan blue | VWR | 17942E | or other vital stain |
Citar este artigo
Mechanical Dissociation: A Method to Obtain Viable Cells from a Tissue. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20225, doi: (2023).