Mekanisk dissociation: En metode til at opnå levedygtige celler fra et væv
Published: April 30, 2023
Abstract
Kilde: Garaud et. al., En enkel og hurtig protokol til ikke-enzymatisk dissociate friske humane væv til analyse af infiltrerende lymfocytter. J. Vis. Exp. (2014).
Denne video beskriver den ikke-enzymatiske dissociation af frisk humant væv for at opnå levedygtige celler. Teknikken anvendes til kvalitativ og kvantitativ analyse af CD45 positive celler (lymfocytter/ leukocytter), der findes i forskellige normale og ondartede humane væv.
Protocol
1. Forberedelse af vævs homogenatet Dissekeret resected væv (ondartet og normalt væv resected fra operationsstuen) er i patologi lab af uddannet personale til øjeblikkelig afhentning. Tumor, NANT (taget længst afstand fra tumoren som muligt) og normale vævsfragmenter behandles rutinemæssigt inden for 1 – 3 timers kirurgisk udskæring i et BSL2-laboratorium ved hjælp af standard biosikkerhedsprocedurer for humant væv. Et rutediagram over protokollen er illustreret i figur 1. V…
Representative Results
Figur 1: Protokolrutediagram. Vores procedure for behandling af friske humane væv og nogle analytiske tilgange, der efterfølgende kan bruges til at vurdere lymfocytter infiltrere humane væv er vist. Figur 2: H&E farvet billede af et brysttumorvævsaftryk. Dette aftryk, taget fra en frisk br…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Materials
| GentleMacs Dissociator | Miltenyi Biotec | 130-093-235 | BD Medimachine is somewhat equivalent |
| Centrifuge 5810 R | Eppendorf | or other standard table top centrifuge | |
| Centrifuge 5417 R | Eppendorf | or other standard microcentrifuge | |
| Esco Class II A2 Biosafety Cabinet | ESCO global | or other standard BSL2 hood | |
| Inverted Microscope | Nikon eclipse TS100 | or other microscope compatible for a hemacytometer | |
| Bürker Chamber Marienfield | 640210 | or other standard hemacytometer | |
| Navios Flow Cytometer | Beckman Coulter | or other flow cytometer (8-10 color recommended) | |
| GentleMacs C-Tube | Miltenyi Biotec | 130-096-344 | BD Medimachine uses Filcon |
| Cell Culture Dish | Sarstedt | 72,710 | or other non-pyrogenic plasticware |
| Disposable Scalpel | Swann-Morton | 510 | or standard single use sterile scalpel |
| BD Cell Strainer 40 µm | Becton Dickinson | 734-0002 | or other non-pyrogenic plasticware |
| BD Falcon Tube 50 ml | Becton Dickinson | 352070 | or other non-pyrogenic plasticware |
| BD Falcon Tube 15 ml | Becton Dickinson | 352097 | or other non-pyrogenic plasticware |
| BD FACS Tube 5 ml | Becton Dickinson | 352008 | or other non-pyrogenic plasticware |
| Sterile Pasteur Pipette 5 ml | VWR | 612-1685 | or other non-pyrogenic plasticware |
| Microfuge Tube 1.5 ml | Eppendorf | 7805-00 | or other non-pyrogenic plasticware |
| X-Vivo 20 | Lonza | BE04-448Q | serum-free medium recommended |
| Phosphate buffered saline | Lonza | BE17-516F | standard physiological PBS |
| Trypan blue | VWR | 17942E | or other vital stain |
Citar este artigo
Mechanical Dissociation: A Method to Obtain Viable Cells from a Tissue. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20225, doi: (2023).