3D-kultur Källare Membrananalys: Odling av cancerceller på 3D källarmembranproteinmatris för att studera cellinvasion
Published: April 30, 2023
Abstract
Källa: Cvetković, D., et al. Kvantifiering av bröstcancercellinvasivitet med hjälp av en tredimensionell (3D) modell. J. Vis. Exp. (2014).
Denna video ger en detaljerad metodik för att odla bröstcancerceller i en 3D källarmembranproteinmatris, vilket exemplifierar potentialen hos 3D-kulturen vid bedömning av cellinvasion i den omgivande miljön.
Protocol
1. Tredimensionell kultur av bröstcancerceller i källarmembranmatris (inbäddningstekniken) Hantering av Matrigel källarmembranmatris: Tina på is över natten vid 4 °C. Källarmembranmatrisen är flytande vid låg temperatur men stelnar vid rumstemperatur. Håll källarmembranmatrisen på is( figurerna 1A-B). Täck den konfokala glasbottnen nr 1 med 50 μl källarmembranmatris genom att sprida matrisen med hjälp av spetsen på en P-200 Pipetman i ett spiralmön…
Representative Results
Figur 1. Tredimensionell kultur av MDA-MB-231 bröstcancerceller i källaren membran matris (inbäddningstekniken). A-B) Ett schema över den experimentella installationen (utförs i rökhuven). C) Brunnen på den glasbottnade skålen belagd med 50 μl källarmembranmatris. D) Skålar(er) placerade i en cellkulturinkubator (vid 37 °C med 5% CO2) för att tillåta matrisen att stelna i minst 30 min. E) Cellerna trypsinise…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Materials
| 35-mm glass-bottomed Confocal No.1 culture dishes | MatTek Corporation | P35G-1.0-14-C | Precooled before use |
| Bovine serum albumin (BSA) | BioShop | ALB003.100 | Used at 3% for IF |
| 1.5 ml tubes | VWR | CA10011-700 | CA10011-700 |
| 100-mm culture dish BD353003 | VWR | CABD353003 | Sterile, disposable |
| 15 ml Falcon tube | VWR | CA21008-918 | Sterile, disposable |
| 1 ml filtered tips | VWR | 10011-350 | Sterile, disposable |
| 200 μl filtered tips | VWR | 22234-016 | Sterile, disposable |
| 20 μl filtered tips | VWR | 22234-008 | Sterile, disposable |
| Fetal bovine serum (FBS) | Sigma | F1051 | Used at 10% (v/v) |
| RPMI 1640 Medium with Glutamine | Life Technologies | 11875-119 | Used for culturing of MDA-MB-231 cells |
| MEGM (bullet kit): MEBM (CC3151)+Single quots (CC4136) | Lonza | CC-3150 | Used for culturing of MCF10A cells |
| Olympus IX-81 microscope | Olympus | Used for 3D culture imaging (DIC images at 10X and 40X) |
Citar este artigo
3D Culture Basement Membrane Assay: Culturing Cancer Cells on 3D Basement Membrane Protein Matrix to Study Cell Invasion. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20220, doi: (2023).