3D-Kultur-Keller-Membran-Assay: Kultivieren von Krebszellen auf 3D Basement Membrane Protein Matrix zur Untersuchung der Zellinvasion

Published: April 30, 2023

Abstract

Quelle: Cvetkovic, D., et al. Quantifizierung der Brustkrebszell-Invasiveness mit einem dreidimensionalen (3D) Modell. J. Vis. Exp. (2014).

Dieses Video bietet eine detaillierte Methodik zum Wachstum von Brustkrebszellen in einer 3D-Kellermembran-Proteinmatrix, die das Potenzial der 3D-Kultur bei der Bewertung der Zellinvasion in die Umgebung veranschaulicht.

Protocol

1. Dreidimensionale Kultur von Brustkrebszellen in Basement Membrane Matrix (The Embedment Technique) Handhabung der Matrigel-Kellermembranmatrix: Über Nacht bei 4 °C auf Eis auftauen. Die Kellermembranmatrix ist bei niedriger Temperatur flüssig, erstarrt aber bei Raumtemperatur. Kellermembranmatrix auf Eis halten (Abbildungen 1A-B). Bedecken Sie die konfokale Glasbodenschale Nr.1 mit 50 l Kellermembranmatrix, indem Sie die Matrix mit der Spitze eines P-200 Pipetm…

Representative Results

Abbildung 1. Dreidimensionale Kultur von MDA-MB-231 Brustkrebszellen in der Kellermembranmatrix (die Einbettungstechnik). A-B) Ein Schaltplan des Versuchsaufbaus (durchgeführt in der Dunstabzugshaube). C) Der Brunnen der Glasbodenschale, der mit einer Kellermembranmatrix von 50 l beschichtet ist. D) Dish(en) in einem Zellkultur-Inkubator (bei 37 °C mit 5% CO2) platziert, damit die Matrix für mindestens 30 min verfestig…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Materials

35-mm glass-bottomed Confocal No.1 culture dishes MatTek Corporation P35G-1.0-14-C Precooled before use
Bovine serum albumin (BSA) BioShop ALB003.100 Used at 3% for IF
1.5 ml tubes VWR CA10011-700 CA10011-700
100-mm culture dish BD353003 VWR CABD353003 Sterile, disposable
15 ml Falcon tube VWR CA21008-918 Sterile, disposable
1 ml filtered tips VWR 10011-350 Sterile, disposable
200 μl filtered tips VWR 22234-016 Sterile, disposable
20 μl filtered tips VWR 22234-008 Sterile, disposable
Fetal bovine serum (FBS) Sigma F1051 Used at 10% (v/v)
RPMI 1640 Medium with Glutamine Life Technologies 11875-119 Used for culturing of MDA-MB-231 cells
MEGM (bullet kit): MEBM (CC3151)+Single quots (CC4136) Lonza CC-3150 Used for culturing of MCF10A cells
Olympus IX-81 microscope Olympus Used for 3D culture imaging (DIC images at 10X and 40X)

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Citar este artigo
3D Culture Basement Membrane Assay: Culturing Cancer Cells on 3D Basement Membrane Protein Matrix to Study Cell Invasion. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20220, doi: (2023).

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