3D-cultuur keldermembraantest: cultiveren van kankercellen op 3D-keldermembraaneiwitmatrix om celinvasie te bestuderen
Published: April 30, 2023
Abstract
Bron: Cvetković, D., et al. Kwantificering van borstkankercelinvasiviteit met behulp van een driedimensionaal (3D)-model. Drs. J. Vis. Exp. (2014).
Deze video biedt een gedetailleerde methodologie om borstkankercellen te laten groeien in een 3D-keldermembraaneiwitmatrix, die het potentieel van 3D-cultuur illustreert bij de beoordeling van celinvasie in de omgeving.
Protocol
1. Driedimensionale cultuur van borstkankercellen in keldermembraanmatrix (de inbeddingstechniek) Behandeling Matrigel keldermembraanmatrix: Ontdooi ‘s nachts op ijs bij 4 °C. Keldermembraanmatrix is vloeibaar bij lage temperatuur, maar stolt bij kamertemperatuur. Houd keldermembraanmatrix op ijs (Figuren 1A-B). Bedek de confocale no.1 glazen bodemschaal met 50 μl keldermembraanmatrix door de matrix te spreiden met behulp van de punt van een P-200 Pipetman in een s…
Representative Results
Figuur 1. Driedimensionale cultuur van MDA-MB-231 borstkankercellen in keldermembraanmatrix (de inbeddingstechniek). A-B) Een schema van de experimentele opstelling (uitgevoerd in de zuurkast). C) De put van de schotel met glazen bodem bedekt met 50 μl keldermembraanmatrix. D) Schotel(s) geplaatst in een celkweekincubator (bij 37 °C met 5% CO2) om de matrix minstens 30 min. E te laten stollen) Cellen werden trypsinized….
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Materials
| 35-mm glass-bottomed Confocal No.1 culture dishes | MatTek Corporation | P35G-1.0-14-C | Precooled before use |
| Bovine serum albumin (BSA) | BioShop | ALB003.100 | Used at 3% for IF |
| 1.5 ml tubes | VWR | CA10011-700 | CA10011-700 |
| 100-mm culture dish BD353003 | VWR | CABD353003 | Sterile, disposable |
| 15 ml Falcon tube | VWR | CA21008-918 | Sterile, disposable |
| 1 ml filtered tips | VWR | 10011-350 | Sterile, disposable |
| 200 μl filtered tips | VWR | 22234-016 | Sterile, disposable |
| 20 μl filtered tips | VWR | 22234-008 | Sterile, disposable |
| Fetal bovine serum (FBS) | Sigma | F1051 | Used at 10% (v/v) |
| RPMI 1640 Medium with Glutamine | Life Technologies | 11875-119 | Used for culturing of MDA-MB-231 cells |
| MEGM (bullet kit): MEBM (CC3151)+Single quots (CC4136) | Lonza | CC-3150 | Used for culturing of MCF10A cells |
| Olympus IX-81 microscope | Olympus | Used for 3D culture imaging (DIC images at 10X and 40X) |
Citar este artigo
3D Culture Basement Membrane Assay: Culturing Cancer Cells on 3D Basement Membrane Protein Matrix to Study Cell Invasion. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20220, doi: (2023).