Overview
यह वीडियो एक इंट्राडक्टल इंजेक्शन तकनीक का वर्णन करता है जहां हम माउस स्तन ग्रंथियों की नलिकाओं में इंजेक्शन मिश्रण वितरित करते हैं।
Protocol
1. इंट्राडक्टल इंजेक्शन
- सर्जिकल प्रक्रिया के दौरान aseptic तकनीकों का उपयोग करें।
- दो चौथे इंगिनल एमजी(चित्रा1) के बीच ~ 1 सेमी की लंबाई में त्वचा पर एक चीरा साइट बनाएं। ध्यान से त्वचा फ्लैप (एमजी के साथ) को पैरीटल पेरिटोनम से अलग करें ताकि स्तन डक्टल पेड़ की कल्पना की जा सके।
- ध्यान से वॉचमेकर के संदंश के साथ निप्पल पकड़ें और किसी भी पास की त्वचा को काटने के बिना बाहरी निप्पल को हटा दें, एक माइक्रो-विच्छेदन कैंची का उपयोग करके।
- लोड ~ 3-5 विज्ञापन-क्रे इंजेक्शन मिश्रण के μL एक 33 जी धातु हब सुई चिपका के साथ एक 25 μL हैमिल्टन सिरिंज में। मिश्रण में शामिल नीले रंग के आधार पर सिरिंज में इंजेक्शन मिश्रण की मात्रा का अनुमान लगाएं।
नोट: स्तनपान कराने वाली महिलाओं के एमजी में इंजेक्शन लगाते समय 3-4 सप्ताह पुरानी महिलाओं और एक बड़ी मात्रा (जैसे, 10 माइक्रोल) के एमजी में इंजेक्शन लगाते समय एक छोटी मात्रा (जैसे, 3 माइक्रोल) का उपयोग करें। - धीरे-धीरे एक ठीक घुमावदार चिमटी के साथ त्वचा फ्लैप के किनारे पकड़ो और विज्ञापन-क्रे इंजेक्शन मिश्रण धीरे-धीरे निप्पल में इंजेक्ट करें, इस बीच स्तन डक्टल पेड़ में नीले रंग के प्रसार की निगरानी करें। डक्टल ल्यूमेन को नुकसान से बचने के लिए इंजेक्शन की दर को जितना संभव हो उतना कम बनाए रखें।
नोट: इंजेक्शन तरल पदार्थ (जैसा कि शामिल ब्रोमोफेनोल ब्लू डाई द्वारा सचित्र) स्ट्रोमल डिब्बे में लीक किए बिना पूरे डक्टल पेड़ में फैलता है, एक सफल इंट्राडक्टल इंजेक्शन को इंगित करता है। - इंजेक्शन तरल पदार्थ के किसी भी रिसाव से बचने के लिए धीरे-धीरे निप्पल से सुई वापस लें।
- एमजी या इंजेक्शन निप्पल के आसपास के क्षेत्र के डिस्टल साइड (यानी निप्पल से दूर) की जांच करें। ध्यान दें कि सूजन नीली डाई (यानी, पास के स्ट्रोमा में डाई डिफ्यूजिंग) एक सफल इंट्राड्यूक्टल इंजेक्शन के बजाय एक स्तन वसा पैड इंजेक्शन इंगित करता है।
- घाव क्लिप के साथ त्वचा में सर्जिकल घावों (1.2 से) को बंद करें।
2. पश्चात देखभाल
- संज्ञाहरण से माउस निकालें और वसूली के लिए एक साफ पिंजरे के अंदर एक हीटिंग पैड पर जगह है।
- 5 मिलीग्राम/किलो फिर से, सर्जरी के बाद 24 घंटे में नीचे से meloxicam प्रशासन ।
- जानवर की सामान्य स्थितियों की निगरानी करें और 5 दिनों के लिए चीरा साइट पर संक्रमण के संकेतों की तलाश करें।
- घाव क्लिप सर्जरी के बाद ~ 7-10 दिन हटा रहे हैं।
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Representative Results
चित्रा 1: एक एमजी में विज्ञापन-क्री वायरस के इंट्राड्यूक्टल इंजेक्शन का योजनाबद्ध आरेख। (A)दो चौथे एमजीएस के बीच मिडलाइन में चीरा साइट ।(B)विज्ञापन-क्री के इंट्राडक्टल इंजेक्शन एक नीले रंग के साथ (बेहतर दृश्य के लिए) चौथे MGs में से एक में ।(C)घाव क्लिप द्वारा त्वचा में चीरा के समापन
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 33-gauge needle | Hamilton | 7803-05 | point style 3 blunt |
| 7mm Reflex Clip | Braintree Scientific | RF7 CS | |
| Adenovirus, Ad-K5-Cre | University of Iowa Viral Vector Core | Ad5-bk5-Cre (VVC-Berns-1547) | |
| Adenovirus, Ad-K8-Cre | University of Iowa Viral Vector Core | Ad5mK8-nlsCre | |
| Bromophenol Blue | Sigma-Aldrich | B0126-25G | |
| Hamilton syringe | Hamilton | 7636-01 | 0.025 mL |
| Micro-dissecting scissors | Pentair | 9M | Watchmaker's Forceps |
| Micro-dissecting tweezers | Dumont | M5 |
