3D-samkultur med direkt interaktion: Samkulturande cancerceller med monocyter för att studera deras interaktion
Published: April 30, 2023
Abstract
Källa: Espinoza-Sánchez, m.fl. Analysera kommunikationen mellan monocyter och primära bröstcancerceller i ett extracellulärt matrisextrakt (ECME)-baserat tredimensionellt system. J. Vis. Exp. (2018).
Denna video beskriver 3D-samkulturen av bröstcancerceller med monocyter för att studera deras interaktion i en extracellulär matris extrakt (ECME) baserade miljö. Denna metod hjälper till att studera specifika funktioner som kollagennedbrytning, immuncellrekrytering och cellinvasion.
Protocol
1.3D samkulturer med direkt interaktion Etikett BrC celler och monocyter med olika fluorescerande färgämnen före cellkulturen för att möjliggöra oberoende sortering av varje cell härstamning efter kultur för analys av mRNA och protein uttryck. Använd kommersiellt tillgängliga derivat av kumarin och rhodamin som fritt passerar genom cellmembranet i levande celler. Ett allmänt protokoll för märkning är följande: Förbered ett monoskikt av BrC-celler av intresse (2 × 10<sup…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Materials
| U937 | American Type Culture Collection ATCC | CRL-1593.2 | Monocytic cell line/histiocytic lymphoma |
| THP-1 | American Type Culture Collection ATCC | TIB-202 | Monocytic cell line/acute monocytic leukemia |
| MCF-10A | American Type Culture Collection ATCC | CRL-10317 | Non-transformed breast cell line |
| MCF-7 | American Type Culture Collection ATCC | HTB-22 | Breast Cancer Cell line |
| MDA-MB-231 | American Type Culture Collection ATCC | HTB-26 | Breast Cancer Cell line |
| RPMI 1640 medium | GIBCO BRL Life Technologies | 11875-093 | |
| DMEM/F12 | GIBCO BRL Life Technologies | 11039-021 | |
| Antibiotic/Antimycotic | GIBCO BRL Life Technologies | 15240-062 | 100 U/mL penicillin, 100 µg/mL streptomycin, and 0.25 µg/mL Fungizone |
| Fetal Bovine Serum | GIBCO BRL Life Technologies | 16000-044 | |
| Horse serum | GIBCO BRL Life Technologies | 16050114 | |
| 0.05% Trypsin-EDTA 1X | GIBCO BRL Life Technologies | 25300-062 | |
| PBS 1X (Phosphate Buffered Saline | GIBCO BRL Life Technologies | 20012-027 | |
| Epidermal Growth Factor (EGF) | PeproTech | AF-100-15 (1.00mg) | |
| Insulin | SIGMA-ALDRICH | I1882-100MG | |
| Hydrocortisone | SIGMA-ALDRICH | H088-5G | |
| Cholera toxin Vibrio cholerae | SIGMA-ALDRICH | C8052-1MG | |
| Matrigel | Corning Inc | 356237 | Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) mouse sarcoma, extracellular matrix extract, Store at -20°C until use at 4°C |
| Lab-Tek chamber slide with cover (8 well) | Nalge Nunc International | 177402 |
Citar este artigo
3D Co-culture with Direct Interaction: Co-culturing Cancer Cells with Monocytes to Study Their Interaction. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20216, doi: (2023).