Este video describe el co-cultivo 3D de células de cáncer de mama con monocitos para estudiar su interacción en un entorno basado en extracto de matriz extracelular (ECME). Este método ayuda a estudiar características específicas como la degradación del colágeno, el reclutamiento de células inmunes y la invasión celular.
Protocol
1.3D co-culturas con interacción directa Etiquete las células BrC y los monocitos con diferentes colorantes fluorescentes antes del cultivo celular para permitir la clasificación independiente de cada linaje celular después del cultivo para el análisis del ARNM y la expresión de proteínas. Utilice derivados disponibles comercialmente de coumarina y rodemina que pasan libremente a través de la membrana celular de las células vivas. Un protocolo general para el etiquetado es el siguiente…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Materials
U937
American Type Culture Collection ATCC
CRL-1593.2
Monocytic cell line/histiocytic lymphoma
THP-1
American Type Culture Collection ATCC
TIB-202
Monocytic cell line/acute monocytic leukemia
MCF-10A
American Type Culture Collection ATCC
CRL-10317
Non-transformed breast cell line
MCF-7
American Type Culture Collection ATCC
HTB-22
Breast Cancer Cell line
MDA-MB-231
American Type Culture Collection ATCC
HTB-26
Breast Cancer Cell line
RPMI 1640 medium
GIBCO BRL Life Technologies
11875-093
DMEM/F12
GIBCO BRL Life Technologies
11039-021
Antibiotic/Antimycotic
GIBCO BRL Life Technologies
15240-062
100 U/mL penicillin, 100 µg/mL streptomycin, and 0.25 µg/mL Fungizone
Fetal Bovine Serum
GIBCO BRL Life Technologies
16000-044
Horse serum
GIBCO BRL Life Technologies
16050114
0.05% Trypsin-EDTA 1X
GIBCO BRL Life Technologies
25300-062
PBS 1X (Phosphate Buffered Saline
GIBCO BRL Life Technologies
20012-027
Epidermal Growth Factor (EGF)
PeproTech
AF-100-15 (1.00mg)
Insulin
SIGMA-ALDRICH
I1882-100MG
Hydrocortisone
SIGMA-ALDRICH
H088-5G
Cholera toxin Vibrio cholerae
SIGMA-ALDRICH
C8052-1MG
Matrigel
Corning Inc
356237
Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) mouse sarcoma, extracellular matrix extract, Store at -20°C until use at 4°C
3D Co-culture with Direct Interaction: Co-culturing Cancer Cells with Monocytes to Study Their Interaction. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20216, doi: (2023).