Это видео описывает 3D совместной культуры раковых клеток молочной железы с моноцитами для изучения их взаимодействия в экстраклеточной матрицы экстракта (ECME) на основе среды. Этот метод помогает в изучении конкретных особенностей, таких как деградация коллагена, набор иммунных клеток и вторжение клеток.
Protocol
1.3D совместно культуры с прямым взаимодействием Этикетка BrC клеток и моноцитов с различными флуоресцентными красителями перед клеточной культурой, чтобы позволить независимой сортировки каждой линии клеток после культуры для анализа мРНК и экспрессии белка. Используйт?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Materials
U937
American Type Culture Collection ATCC
CRL-1593.2
Monocytic cell line/histiocytic lymphoma
THP-1
American Type Culture Collection ATCC
TIB-202
Monocytic cell line/acute monocytic leukemia
MCF-10A
American Type Culture Collection ATCC
CRL-10317
Non-transformed breast cell line
MCF-7
American Type Culture Collection ATCC
HTB-22
Breast Cancer Cell line
MDA-MB-231
American Type Culture Collection ATCC
HTB-26
Breast Cancer Cell line
RPMI 1640 medium
GIBCO BRL Life Technologies
11875-093
DMEM/F12
GIBCO BRL Life Technologies
11039-021
Antibiotic/Antimycotic
GIBCO BRL Life Technologies
15240-062
100 U/mL penicillin, 100 µg/mL streptomycin, and 0.25 µg/mL Fungizone
Fetal Bovine Serum
GIBCO BRL Life Technologies
16000-044
Horse serum
GIBCO BRL Life Technologies
16050114
0.05% Trypsin-EDTA 1X
GIBCO BRL Life Technologies
25300-062
PBS 1X (Phosphate Buffered Saline
GIBCO BRL Life Technologies
20012-027
Epidermal Growth Factor (EGF)
PeproTech
AF-100-15 (1.00mg)
Insulin
SIGMA-ALDRICH
I1882-100MG
Hydrocortisone
SIGMA-ALDRICH
H088-5G
Cholera toxin Vibrio cholerae
SIGMA-ALDRICH
C8052-1MG
Matrigel
Corning Inc
356237
Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) mouse sarcoma, extracellular matrix extract, Store at -20°C until use at 4°C
3D Co-culture with Direct Interaction: Co-culturing Cancer Cells with Monocytes to Study Their Interaction. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20216, doi: (2023).