Co-cultura 3D com interação direta: co-cultivar células cancerígenas com monócitos para estudar sua interação
Published: April 30, 2023
Abstract
Fonte: Espinoza-Sánchez, et al. Analisando a Comunicação Entre Monócitos e Células Primárias do Câncer de Mama em um Extrato de Matriz Extracelular (ECME) sistema tridimensional. J. Vis. Exp. (2018).
Este vídeo descreve a cocultura 3D de células cancerígenas de mama com monócitos para estudar sua interação em um ambiente baseado em extrato de matriz extracelular (ECME). Este método ajuda no estudo de características específicas, como degradação do colágeno, recrutamento de células imunes e invasão celular.
Protocol
1.3D co-culturas com interação direta Rotular células BrC e monócitos com diferentes corantes fluorescentes antes da cultura celular para permitir a classificação independente de cada linhagem celular após cultura para análise de mRNA e expressão proteica. Use derivados comercialmente disponíveis de coumarina e rhodamina que passam livremente pela membrana celular das células vivas. Um protocolo geral para rotulagem é o seguinte: Prepare uma monocamada de células brc de int…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Materials
| U937 | American Type Culture Collection ATCC | CRL-1593.2 | Monocytic cell line/histiocytic lymphoma |
| THP-1 | American Type Culture Collection ATCC | TIB-202 | Monocytic cell line/acute monocytic leukemia |
| MCF-10A | American Type Culture Collection ATCC | CRL-10317 | Non-transformed breast cell line |
| MCF-7 | American Type Culture Collection ATCC | HTB-22 | Breast Cancer Cell line |
| MDA-MB-231 | American Type Culture Collection ATCC | HTB-26 | Breast Cancer Cell line |
| RPMI 1640 medium | GIBCO BRL Life Technologies | 11875-093 | |
| DMEM/F12 | GIBCO BRL Life Technologies | 11039-021 | |
| Antibiotic/Antimycotic | GIBCO BRL Life Technologies | 15240-062 | 100 U/mL penicillin, 100 µg/mL streptomycin, and 0.25 µg/mL Fungizone |
| Fetal Bovine Serum | GIBCO BRL Life Technologies | 16000-044 | |
| Horse serum | GIBCO BRL Life Technologies | 16050114 | |
| 0.05% Trypsin-EDTA 1X | GIBCO BRL Life Technologies | 25300-062 | |
| PBS 1X (Phosphate Buffered Saline | GIBCO BRL Life Technologies | 20012-027 | |
| Epidermal Growth Factor (EGF) | PeproTech | AF-100-15 (1.00mg) | |
| Insulin | SIGMA-ALDRICH | I1882-100MG | |
| Hydrocortisone | SIGMA-ALDRICH | H088-5G | |
| Cholera toxin Vibrio cholerae | SIGMA-ALDRICH | C8052-1MG | |
| Matrigel | Corning Inc | 356237 | Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) mouse sarcoma, extracellular matrix extract, Store at -20°C until use at 4°C |
| Lab-Tek chamber slide with cover (8 well) | Nalge Nunc International | 177402 |
Citar este artigo
3D Co-culture with Direct Interaction: Co-culturing Cancer Cells with Monocytes to Study Their Interaction. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20216, doi: (2023).