3D-samkultur med direkte interaksjon: Kokulturerende kreftceller med monocytter for å studere samspillet
Published: April 30, 2023
Abstract
Kilde: Espinoza-Sánchez, et al. Analysere kommunikasjonen mellom monocytter og primære brystkreftceller i et ekstracellulært matriseekstrakt (ECME)-basert tredimensjonalt system. J. Vis. Exp. (2018).
Denne videoen beskriver 3D-samkulturen av brystkreftceller med monocytter for å studere deres interaksjon i et ekstracellulært matriseekstrakt (ECME) basert miljø. Denne metoden hjelper deg med å studere spesifikke funksjoner som kollagenforringelse, rekruttering av immunceller og celleinvasjon.
Protocol
1.3D samkulturer med direkte interaksjon Merk BrC-celler og monocytter med forskjellige fluorescerende fargestoffer før cellekulturen for å tillate uavhengig sortering av hver cellelinje etter kultur for analyse av mRNA og proteinuttrykk. Bruk kommersielt tilgjengelige derivater av kumarin og rhodamin som fritt passerer gjennom cellemembranen til levende celler. En generell protokoll for merking er følgende: Forbered en monolayer av BrC-celler av interesse (2 × 106 celler…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Materials
| U937 | American Type Culture Collection ATCC | CRL-1593.2 | Monocytic cell line/histiocytic lymphoma |
| THP-1 | American Type Culture Collection ATCC | TIB-202 | Monocytic cell line/acute monocytic leukemia |
| MCF-10A | American Type Culture Collection ATCC | CRL-10317 | Non-transformed breast cell line |
| MCF-7 | American Type Culture Collection ATCC | HTB-22 | Breast Cancer Cell line |
| MDA-MB-231 | American Type Culture Collection ATCC | HTB-26 | Breast Cancer Cell line |
| RPMI 1640 medium | GIBCO BRL Life Technologies | 11875-093 | |
| DMEM/F12 | GIBCO BRL Life Technologies | 11039-021 | |
| Antibiotic/Antimycotic | GIBCO BRL Life Technologies | 15240-062 | 100 U/mL penicillin, 100 µg/mL streptomycin, and 0.25 µg/mL Fungizone |
| Fetal Bovine Serum | GIBCO BRL Life Technologies | 16000-044 | |
| Horse serum | GIBCO BRL Life Technologies | 16050114 | |
| 0.05% Trypsin-EDTA 1X | GIBCO BRL Life Technologies | 25300-062 | |
| PBS 1X (Phosphate Buffered Saline | GIBCO BRL Life Technologies | 20012-027 | |
| Epidermal Growth Factor (EGF) | PeproTech | AF-100-15 (1.00mg) | |
| Insulin | SIGMA-ALDRICH | I1882-100MG | |
| Hydrocortisone | SIGMA-ALDRICH | H088-5G | |
| Cholera toxin Vibrio cholerae | SIGMA-ALDRICH | C8052-1MG | |
| Matrigel | Corning Inc | 356237 | Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) mouse sarcoma, extracellular matrix extract, Store at -20°C until use at 4°C |
| Lab-Tek chamber slide with cover (8 well) | Nalge Nunc International | 177402 |
Citar este artigo
3D Co-culture with Direct Interaction: Co-culturing Cancer Cells with Monocytes to Study Their Interaction. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20216, doi: (2023).