直接相互作用を伴う3D共培養:単球とがん細胞を共培養し、相互作用を研究する
Published: April 30, 2023
Abstract
出典:エスピノーザ・サンチェス、他の細胞外マトリックス抽出物(ECME)ベースの3次元システムにおける単球と原発性乳癌細胞間のコミュニケーションを分析する。(2018).
このビデオでは、細胞外マトリックス抽出物(ECME)ベースの環境での相互作用を研究するために、単球を有する乳癌細胞の3D共培養について説明します。この方法は、コラーゲン分解、免疫細胞のリクルート、細胞浸潤などの特定の特徴を研究するのに役立ちます。
Protocol
1.3D直接の相互作用を伴う共文化 細胞培養前に異なる蛍光色素を有するBrC細胞および単球を標識し、mRNAおよびタンパク質発現の分析のために培養後の各細胞系統の独立した選別を可能にする。生細胞の細胞膜を自由に通過するクマリンおよびローダミンの市販の誘導体を使用する。ラベル付けの一般的なプロトコルは次のとおりです。 目的のBrC細胞の単層(2×106細胞…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Materials
| U937 | American Type Culture Collection ATCC | CRL-1593.2 | Monocytic cell line/histiocytic lymphoma |
| THP-1 | American Type Culture Collection ATCC | TIB-202 | Monocytic cell line/acute monocytic leukemia |
| MCF-10A | American Type Culture Collection ATCC | CRL-10317 | Non-transformed breast cell line |
| MCF-7 | American Type Culture Collection ATCC | HTB-22 | Breast Cancer Cell line |
| MDA-MB-231 | American Type Culture Collection ATCC | HTB-26 | Breast Cancer Cell line |
| RPMI 1640 medium | GIBCO BRL Life Technologies | 11875-093 | |
| DMEM/F12 | GIBCO BRL Life Technologies | 11039-021 | |
| Antibiotic/Antimycotic | GIBCO BRL Life Technologies | 15240-062 | 100 U/mL penicillin, 100 µg/mL streptomycin, and 0.25 µg/mL Fungizone |
| Fetal Bovine Serum | GIBCO BRL Life Technologies | 16000-044 | |
| Horse serum | GIBCO BRL Life Technologies | 16050114 | |
| 0.05% Trypsin-EDTA 1X | GIBCO BRL Life Technologies | 25300-062 | |
| PBS 1X (Phosphate Buffered Saline | GIBCO BRL Life Technologies | 20012-027 | |
| Epidermal Growth Factor (EGF) | PeproTech | AF-100-15 (1.00mg) | |
| Insulin | SIGMA-ALDRICH | I1882-100MG | |
| Hydrocortisone | SIGMA-ALDRICH | H088-5G | |
| Cholera toxin Vibrio cholerae | SIGMA-ALDRICH | C8052-1MG | |
| Matrigel | Corning Inc | 356237 | Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) mouse sarcoma, extracellular matrix extract, Store at -20°C until use at 4°C |
| Lab-Tek chamber slide with cover (8 well) | Nalge Nunc International | 177402 |
Citar este artigo
3D Co-culture with Direct Interaction: Co-culturing Cancer Cells with Monocytes to Study Their Interaction. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20216, doi: (2023).