Co-coltura 3D con interazione diretta: co-coltivare cellule tumorali con monociti per studiarne l'interazione
Published: April 30, 2023
Abstract
Fonte: Espinoza-Sánchez, et al. (2018).
Questo video descrive la co-coltura 3D delle cellule tumorali del seno con monociti per studiarne l’interazione in un ambiente basato sull’estratto di matrice extracellulare (ECME). Questo metodo aiuta a studiare caratteristiche specifiche come la degradazione del collagene, il reclutamento delle cellule immunitarie e l’invasione cellulare.
Protocol
1.3D co-culture con interazione diretta Etichettare le cellule BrC e i monociti con diversi coloranti fluorescenti prima della coltura cellulare per consentire lo smistamento indipendente di ogni lignaggio cellulare dopo la coltura per l’analisi dell’mRNA e dell’espressione proteica. Utilizzare derivati commercialmente disponibili di cumarina e rodamina che passano liberamente attraverso la membrana cellulare delle cellule viventi. Un protocollo generale per l’etichettatura è il seguente: …
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Materials
| U937 | American Type Culture Collection ATCC | CRL-1593.2 | Monocytic cell line/histiocytic lymphoma |
| THP-1 | American Type Culture Collection ATCC | TIB-202 | Monocytic cell line/acute monocytic leukemia |
| MCF-10A | American Type Culture Collection ATCC | CRL-10317 | Non-transformed breast cell line |
| MCF-7 | American Type Culture Collection ATCC | HTB-22 | Breast Cancer Cell line |
| MDA-MB-231 | American Type Culture Collection ATCC | HTB-26 | Breast Cancer Cell line |
| RPMI 1640 medium | GIBCO BRL Life Technologies | 11875-093 | |
| DMEM/F12 | GIBCO BRL Life Technologies | 11039-021 | |
| Antibiotic/Antimycotic | GIBCO BRL Life Technologies | 15240-062 | 100 U/mL penicillin, 100 µg/mL streptomycin, and 0.25 µg/mL Fungizone |
| Fetal Bovine Serum | GIBCO BRL Life Technologies | 16000-044 | |
| Horse serum | GIBCO BRL Life Technologies | 16050114 | |
| 0.05% Trypsin-EDTA 1X | GIBCO BRL Life Technologies | 25300-062 | |
| PBS 1X (Phosphate Buffered Saline | GIBCO BRL Life Technologies | 20012-027 | |
| Epidermal Growth Factor (EGF) | PeproTech | AF-100-15 (1.00mg) | |
| Insulin | SIGMA-ALDRICH | I1882-100MG | |
| Hydrocortisone | SIGMA-ALDRICH | H088-5G | |
| Cholera toxin Vibrio cholerae | SIGMA-ALDRICH | C8052-1MG | |
| Matrigel | Corning Inc | 356237 | Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) mouse sarcoma, extracellular matrix extract, Store at -20°C until use at 4°C |
| Lab-Tek chamber slide with cover (8 well) | Nalge Nunc International | 177402 |
Citar este artigo
3D Co-culture with Direct Interaction: Co-culturing Cancer Cells with Monocytes to Study Their Interaction. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20216, doi: (2023).