3D שיתוף תרבות עם אינטראקציה ישירה: שיתוף culturing תאים סרטניים עם מונוציטים ללמוד את האינטראקציה שלהם
Published: April 30, 2023
Abstract
מקור: אספינוזה-סאנצ’ס, ואח ‘. ניתוח התקשורת בין מונוציטים ותאי סרטן שד ראשוניים בתמצית מטריקס חוץ-תאית (ECME) מבוססת מערכת תלת מימדית. (2018).
וידאו זה מתאר את התרבות המשותפת 3D של תאים סרטניים בשד עם מונוציטים ללמוד את האינטראקציה שלהם בסביבה מבוססת תמצית מטריצה חוץ תאית (ECME). שיטה זו מסייעת בחקר תכונות ספציפיות כגון השפלת קולגן, גיוס תאים חיסוניים ופלישה לתאים.
Protocol
1.3D תרבויות משותפות עם אינטראקציה ישירה תווית תאי BrC ומונוציטים עם צבעים פלואורסצנטיים שונים לפני תרבות התא כדי לאפשר מיון עצמאי של כל שושלת תאים לאחר תרבות לניתוח של mRNA וביטוי חלבון. השתמש נגזרות זמינות מסחרית של קומרין ורודמין כי בחופשיות לעבור דרך קרום התא של תאים חיים. פר…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Materials
| U937 | American Type Culture Collection ATCC | CRL-1593.2 | Monocytic cell line/histiocytic lymphoma |
| THP-1 | American Type Culture Collection ATCC | TIB-202 | Monocytic cell line/acute monocytic leukemia |
| MCF-10A | American Type Culture Collection ATCC | CRL-10317 | Non-transformed breast cell line |
| MCF-7 | American Type Culture Collection ATCC | HTB-22 | Breast Cancer Cell line |
| MDA-MB-231 | American Type Culture Collection ATCC | HTB-26 | Breast Cancer Cell line |
| RPMI 1640 medium | GIBCO BRL Life Technologies | 11875-093 | |
| DMEM/F12 | GIBCO BRL Life Technologies | 11039-021 | |
| Antibiotic/Antimycotic | GIBCO BRL Life Technologies | 15240-062 | 100 U/mL penicillin, 100 µg/mL streptomycin, and 0.25 µg/mL Fungizone |
| Fetal Bovine Serum | GIBCO BRL Life Technologies | 16000-044 | |
| Horse serum | GIBCO BRL Life Technologies | 16050114 | |
| 0.05% Trypsin-EDTA 1X | GIBCO BRL Life Technologies | 25300-062 | |
| PBS 1X (Phosphate Buffered Saline | GIBCO BRL Life Technologies | 20012-027 | |
| Epidermal Growth Factor (EGF) | PeproTech | AF-100-15 (1.00mg) | |
| Insulin | SIGMA-ALDRICH | I1882-100MG | |
| Hydrocortisone | SIGMA-ALDRICH | H088-5G | |
| Cholera toxin Vibrio cholerae | SIGMA-ALDRICH | C8052-1MG | |
| Matrigel | Corning Inc | 356237 | Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) mouse sarcoma, extracellular matrix extract, Store at -20°C until use at 4°C |
| Lab-Tek chamber slide with cover (8 well) | Nalge Nunc International | 177402 |
Citar este artigo
3D Co-culture with Direct Interaction: Co-culturing Cancer Cells with Monocytes to Study Their Interaction. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20216, doi: (2023).