3D-Co-Kultur mit direkter Interaktion: Co-Culturing Cancer Cells mit Monozyten, um ihre Interaktion zu studieren
Published: April 30, 2023
Abstract
Quelle: Espinoza-Sénchez, et al. Analyse der Kommunikation zwischen Monozyten und primären Brustkrebszellen in einem extrazellulären Matrix-Extrakt (ECME)-basierten dreidimensionalen System. J. Vis. Exp. (2018).
Dieses Video beschreibt die 3D-Kokultur von Brustkrebszellen mit Monozyten, um deren Wechselwirkung in einer extrazellulären Matrixextrakt-Umgebung (ECME) zu untersuchen. Diese Methode hilft bei der Untersuchung spezifischer Merkmale wie Kollagenabbau, Immunzellrekrutierung und Zellinvasion.
Protocol
1.3D Ko-Kulturen mit direkter Interaktion Bezeichnung Von BrC-Zellen und Monozyten mit verschiedenen fluoreszierenden Farbstoffen vor der Zellkultur, um eine unabhängige Sortierung jeder Zelllinie nach Kultur für die Analyse von mRNA und Proteinexpression zu ermöglichen. Verwenden Sie handelsübliche Derivate von Cumarin und Rhodalin, die frei durch die Zellmembran lebender Zellen passieren. Ein allgemeines Protokoll für die Kennzeichnung ist folgendes: Bereiten Sie eine Monoschicht…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Materials
| U937 | American Type Culture Collection ATCC | CRL-1593.2 | Monocytic cell line/histiocytic lymphoma |
| THP-1 | American Type Culture Collection ATCC | TIB-202 | Monocytic cell line/acute monocytic leukemia |
| MCF-10A | American Type Culture Collection ATCC | CRL-10317 | Non-transformed breast cell line |
| MCF-7 | American Type Culture Collection ATCC | HTB-22 | Breast Cancer Cell line |
| MDA-MB-231 | American Type Culture Collection ATCC | HTB-26 | Breast Cancer Cell line |
| RPMI 1640 medium | GIBCO BRL Life Technologies | 11875-093 | |
| DMEM/F12 | GIBCO BRL Life Technologies | 11039-021 | |
| Antibiotic/Antimycotic | GIBCO BRL Life Technologies | 15240-062 | 100 U/mL penicillin, 100 µg/mL streptomycin, and 0.25 µg/mL Fungizone |
| Fetal Bovine Serum | GIBCO BRL Life Technologies | 16000-044 | |
| Horse serum | GIBCO BRL Life Technologies | 16050114 | |
| 0.05% Trypsin-EDTA 1X | GIBCO BRL Life Technologies | 25300-062 | |
| PBS 1X (Phosphate Buffered Saline | GIBCO BRL Life Technologies | 20012-027 | |
| Epidermal Growth Factor (EGF) | PeproTech | AF-100-15 (1.00mg) | |
| Insulin | SIGMA-ALDRICH | I1882-100MG | |
| Hydrocortisone | SIGMA-ALDRICH | H088-5G | |
| Cholera toxin Vibrio cholerae | SIGMA-ALDRICH | C8052-1MG | |
| Matrigel | Corning Inc | 356237 | Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) mouse sarcoma, extracellular matrix extract, Store at -20°C until use at 4°C |
| Lab-Tek chamber slide with cover (8 well) | Nalge Nunc International | 177402 |
Citar este artigo
3D Co-culture with Direct Interaction: Co-culturing Cancer Cells with Monocytes to Study Their Interaction. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20216, doi: (2023).