Co-culture 3D avec interaction directe : co-culture des cellules cancéreuses avec les monocytes pour étudier leur interaction
Published: April 30, 2023
Abstract
Source : Espinoza-Sánchez, et coll. Analysant la communication entre les monocytes et les cellules primaires du cancer du sein dans un système tridimensionnel basé sur l’extrait extracellulaire de matrice (ECME). J. Vis. Exp. (2018).
Cette vidéo décrit la co-culture 3D des cellules cancéreuses du sein avec des monocytes pour étudier leur interaction dans un environnement basé sur l’extrait de matrice extracellulaire (ECME). Cette méthode aide à étudier des dispositifs spécifiques tels que la dégradation de collagène, le recrutement de cellules immunitaires, et l’invasion cellulaire.
Protocol
1.3D co-cultures avec interaction directe Étiquetez les cellules brc et les monocytes avec différents colorants fluorescents avant la culture cellulaire pour permettre un tri indépendant de chaque lignée cellulaire après culture pour l’analyse de l’ARNm et de l’expression protéique. Utilisez des dérivés de la coumarine et de la rhodamine disponibles dans le commerce qui traversent librement la membrane cellulaire des cellules vivantes. Un protocole général d’étiquetage est le…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Materials
| U937 | American Type Culture Collection ATCC | CRL-1593.2 | Monocytic cell line/histiocytic lymphoma |
| THP-1 | American Type Culture Collection ATCC | TIB-202 | Monocytic cell line/acute monocytic leukemia |
| MCF-10A | American Type Culture Collection ATCC | CRL-10317 | Non-transformed breast cell line |
| MCF-7 | American Type Culture Collection ATCC | HTB-22 | Breast Cancer Cell line |
| MDA-MB-231 | American Type Culture Collection ATCC | HTB-26 | Breast Cancer Cell line |
| RPMI 1640 medium | GIBCO BRL Life Technologies | 11875-093 | |
| DMEM/F12 | GIBCO BRL Life Technologies | 11039-021 | |
| Antibiotic/Antimycotic | GIBCO BRL Life Technologies | 15240-062 | 100 U/mL penicillin, 100 µg/mL streptomycin, and 0.25 µg/mL Fungizone |
| Fetal Bovine Serum | GIBCO BRL Life Technologies | 16000-044 | |
| Horse serum | GIBCO BRL Life Technologies | 16050114 | |
| 0.05% Trypsin-EDTA 1X | GIBCO BRL Life Technologies | 25300-062 | |
| PBS 1X (Phosphate Buffered Saline | GIBCO BRL Life Technologies | 20012-027 | |
| Epidermal Growth Factor (EGF) | PeproTech | AF-100-15 (1.00mg) | |
| Insulin | SIGMA-ALDRICH | I1882-100MG | |
| Hydrocortisone | SIGMA-ALDRICH | H088-5G | |
| Cholera toxin Vibrio cholerae | SIGMA-ALDRICH | C8052-1MG | |
| Matrigel | Corning Inc | 356237 | Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) mouse sarcoma, extracellular matrix extract, Store at -20°C until use at 4°C |
| Lab-Tek chamber slide with cover (8 well) | Nalge Nunc International | 177402 |
Citar este artigo
3D Co-culture with Direct Interaction: Co-culturing Cancer Cells with Monocytes to Study Their Interaction. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20216, doi: (2023).