3D-cocultuur met directe interactie: kankercellen co-cultiveren met monocyten om hun interactie te bestuderen
Published: April 30, 2023
Abstract
Bron: Espinoza-Sánchez, et al. Analyse van de communicatie tussen monocyten en primaire borstkankercellen in een extracellulair matrixextract (ECME)-gebaseerd driedimensionaal systeem. J. Vis. Exp. (2018).
Deze video beschrijft de 3D-co-cultuur van borstkankercellen met monocyten om hun interactie te bestuderen in een op extracellulair matrixextract (ECME) gebaseerde omgeving. Deze methode helpt bij het bestuderen van specifieke kenmerken zoals collageendegradatie, rekrutering van immuuncellen en celinvasie.
Protocol
1.3D coculturen met directe interactie Label BrC-cellen en monocyten met verschillende fluorescerende kleurstoffen vóór celkweek om onafhankelijke sortering van elke cellijn na cultuur mogelijk te maken voor analyse van mRNA en eiwitexpressie. Gebruik in de handel verkrijgbaar derivaten van cumarine en rhodamine die vrij door het celmembraan van levende cellen gaan. Een algemeen protocol voor etikettering is het volgende: Bereid een monolaag van BrC-cellen van belang (2 × 106</s…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Materials
| U937 | American Type Culture Collection ATCC | CRL-1593.2 | Monocytic cell line/histiocytic lymphoma |
| THP-1 | American Type Culture Collection ATCC | TIB-202 | Monocytic cell line/acute monocytic leukemia |
| MCF-10A | American Type Culture Collection ATCC | CRL-10317 | Non-transformed breast cell line |
| MCF-7 | American Type Culture Collection ATCC | HTB-22 | Breast Cancer Cell line |
| MDA-MB-231 | American Type Culture Collection ATCC | HTB-26 | Breast Cancer Cell line |
| RPMI 1640 medium | GIBCO BRL Life Technologies | 11875-093 | |
| DMEM/F12 | GIBCO BRL Life Technologies | 11039-021 | |
| Antibiotic/Antimycotic | GIBCO BRL Life Technologies | 15240-062 | 100 U/mL penicillin, 100 µg/mL streptomycin, and 0.25 µg/mL Fungizone |
| Fetal Bovine Serum | GIBCO BRL Life Technologies | 16000-044 | |
| Horse serum | GIBCO BRL Life Technologies | 16050114 | |
| 0.05% Trypsin-EDTA 1X | GIBCO BRL Life Technologies | 25300-062 | |
| PBS 1X (Phosphate Buffered Saline | GIBCO BRL Life Technologies | 20012-027 | |
| Epidermal Growth Factor (EGF) | PeproTech | AF-100-15 (1.00mg) | |
| Insulin | SIGMA-ALDRICH | I1882-100MG | |
| Hydrocortisone | SIGMA-ALDRICH | H088-5G | |
| Cholera toxin Vibrio cholerae | SIGMA-ALDRICH | C8052-1MG | |
| Matrigel | Corning Inc | 356237 | Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) mouse sarcoma, extracellular matrix extract, Store at -20°C until use at 4°C |
| Lab-Tek chamber slide with cover (8 well) | Nalge Nunc International | 177402 |
Citar este artigo
3D Co-culture with Direct Interaction: Co-culturing Cancer Cells with Monocytes to Study Their Interaction. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20216, doi: (2023).