3D Co-kultur med direkte interaktion: Co-dyrkning kræftceller med monocytter til at studere deres interaktion
Published: April 30, 2023
Abstract
Kilde: Espinoza-Sánchez, et al. Analyse af kommunikationen mellem monocytter og primære brystkræftceller i et ekstracellulært matrixekstrakt (ECME)-baseret tredimensionelt system. (2018).
Denne video beskriver 3D-co-kultur af brystkræftceller med monocytter til at studere deres interaktion i en ekstracellulær matrix ekstrakt (ECME) baseret miljø. Denne metode hjælper med at studere specifikke funktioner såsom kollagen nedbrydning, immuncelle rekruttering, og celle invasion.
Protocol
1.3D samkulturer med direkte interaktion Label BRC celler og monocytter med forskellige fluorescerende farvestoffer før cellekultur at tillade uafhængig sortering af hver celle afstamning efter kultur til analyse af mRNA og protein udtryk. Brug kommercielt tilgængelige derivater af cumarin og rhodamin, der frit passerer gennem cellemembranen i levende celler. En generel protokol for mærkning er følgende: Der fremstilles et monolag af BrC-celler af interesse (2 × 106 cel…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Materials
| U937 | American Type Culture Collection ATCC | CRL-1593.2 | Monocytic cell line/histiocytic lymphoma |
| THP-1 | American Type Culture Collection ATCC | TIB-202 | Monocytic cell line/acute monocytic leukemia |
| MCF-10A | American Type Culture Collection ATCC | CRL-10317 | Non-transformed breast cell line |
| MCF-7 | American Type Culture Collection ATCC | HTB-22 | Breast Cancer Cell line |
| MDA-MB-231 | American Type Culture Collection ATCC | HTB-26 | Breast Cancer Cell line |
| RPMI 1640 medium | GIBCO BRL Life Technologies | 11875-093 | |
| DMEM/F12 | GIBCO BRL Life Technologies | 11039-021 | |
| Antibiotic/Antimycotic | GIBCO BRL Life Technologies | 15240-062 | 100 U/mL penicillin, 100 µg/mL streptomycin, and 0.25 µg/mL Fungizone |
| Fetal Bovine Serum | GIBCO BRL Life Technologies | 16000-044 | |
| Horse serum | GIBCO BRL Life Technologies | 16050114 | |
| 0.05% Trypsin-EDTA 1X | GIBCO BRL Life Technologies | 25300-062 | |
| PBS 1X (Phosphate Buffered Saline | GIBCO BRL Life Technologies | 20012-027 | |
| Epidermal Growth Factor (EGF) | PeproTech | AF-100-15 (1.00mg) | |
| Insulin | SIGMA-ALDRICH | I1882-100MG | |
| Hydrocortisone | SIGMA-ALDRICH | H088-5G | |
| Cholera toxin Vibrio cholerae | SIGMA-ALDRICH | C8052-1MG | |
| Matrigel | Corning Inc | 356237 | Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) mouse sarcoma, extracellular matrix extract, Store at -20°C until use at 4°C |
| Lab-Tek chamber slide with cover (8 well) | Nalge Nunc International | 177402 |
Citar este artigo
3D Co-culture with Direct Interaction: Co-culturing Cancer Cells with Monocytes to Study Their Interaction. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20216, doi: (2023).