Микроинъекция эмбриона: Техника доставки соединения в желток зебры
Published: April 30, 2023
Abstract
Источник: Сорлиен, Е.Л., и др. Эффективное производство и идентификация CRISPR/Cas9 генерируемых gene Knockouts в модельной системе Danio rerio. J. Vis. Exp. (2018).
Это видео описывает технику микроинъекции эмбриона для доставки соединений в желточный мешок Зебрафиш.
Protocol
1. Микроинъекция компонентов CRISPR в эмбрионы зебры Настройка разведения танков ночь до инъекций путем размещения числа желаемых мужчин и женщин (как правило, 2 женщины и 1 или 2 мужчины) в племенной бак с разделило на месте. Подготовка микроинъекции пластины с 1,5% агарозы в 1x E3 сре…
Representative Results
Рисунок 1: Сравнение здоровья 24 л.с. инъекционных эмбрионов. Живой эмбрион (A), разработанный до 24 л.с., легко отличить от эмбриона, который прервал развитие (B). Эмбрионы, напоминающие (B) или резко измененные функции (A), такие как кривизн?…
Materials
| RNase-free water | Any brand | Synthesis of guide RNAs. Thermo Fisher and Qiagen both carry suitable water. |
|
| E3 embryo media | Made in house | Media for raising embryos and making injeciton plate. Recipe: http://cshprotocols.cshlp.org/ content/2011/10/pdb.rec66449 |
|
| Methylene Blue | Sigma-Aldrich | M9140 | Added to 1x E3 media to prevent fungal growth on embryos. |
| Petri dish | Thermo Fisher | FB0875711Z | Store embryos, cast injection plate |
| Agarose | Denville | CA3510-8 | Casting injection plate, agarose gels. |
| Microinection mold | Adaptive Science Tools | TU-1 | To create wells to hold embryos during injection |
| Phenol Red | Sigma-Aldrich | P0290 | Dye for visualization of injection |
| Mineral Oil | Sigma-Aldrich | M5904-5ML | To calibrate needle injection volume. |
| Transfer pipettes | Any brand | Moving embryos | |
| Razor blade | Thermo Fisher | 11295-10 | Cutting injection needle, tail clipping adult fish. |
| Incubator | Maintaining embryos at 28.5 C. | ||
| Verticle pipette puller | David Kopf Instruments | 700C | Geneate needles for injection. Additional needle pulling instructions: http:// cshprotocols.cshlp.org/ content/2006/7/pdb.prot4651.long |
| Capillary tubes | Sutter Instruments | BF100-58-10 | Geneate needles for injection. |
| Microloader tips | Eppendorf | 930001007 | Load solution into injection needles |
| Microinjector | World Precision Instruments | PV 820 | Injecting embryos. |
| Disecting microscope | Leica | Injecting embryos. | |
| Microwave | Any brand | Casting injection plate, agarose gels. | |
| Scale | Any brand | Casting injection plate, agarose gels. | |
| Gloves | Any brand | For all aspects of the protocol. | |
| N2 | Any brand | To expell liquid from the capillary for embryo injection | |
| PCR strip tubes | Any brand | For all aspects of the protocol. | |
| 200 µL tips | Any brand | For all aspects of the protocol. | |
| 10 µL tips | Any brand | For all aspects of the protocol. | |
| Micropipettes | Any brand | For all aspects of the protocol. |
Citar este artigo
Embryo Microinjection: A Technique to Deliver a Compound into the Zebrafish Yolk. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20196, doi: (2023).