Agar-montage: een basismethode voor het monteren van levende zebravisembryo's voor langdurige beeldvorming
Published: April 30, 2023
Abstract
Bron: Hagedorn E. J., et al. Generatie van Parabiotische Zebrafish Embryo’s door Chirurgische Fusie van het Ontwikkelen van Blastulae. J.Vis. Exp. (2016).
Deze video beschrijft stap voor stap instructies voor het monteren van levende zebravisembryo’s op 6 putplaat met behulp van laag smeltagarose. Het biedt ook het proces om beelden van levende embryo’s te verkrijgen en deze te analyseren met behulp van software.
Protocol
1. Microscoopopstelling, beeldverwerving, verwerking en analyse Bereid 0,8% laag smeltpunt (LMP) agarose: Voeg 0,8 g LMP agarose toe aan 100 ml E3 en verwarm tot het volledig is opgelost. Tijdens het heet, aliquot 1 ml LMP agarose in 1,5 ml microfuge buizen in een 37 °C verwarmingsblok. De LMP-agarose blijft gesmolten bij 37 °C. Voeg 40 μl 4 mg/ml (25x), pH 7,0 tricaïne toe aan elke 1 ml aliquot LMP agarose bij 37 °C. OPMERKING: Als u met een gepigmenteerde stam werkt, vo…
Materials
| LMP agarose (Ultrapure LMP agarose) | Invitrogen | 16520100 |
| Tricaine (powder) (Tricaine Methanesulfonato, Tricaine-S) | Western Chemical Inc | MS 222 |
| Glass-bottom 6-well plates used for imaging | MatTek | P06G1.5-20-F |
| 10 ml pipette pump (green) (Pipette Pump Pipettor) | Novatech International | F37898-0000 |
Citar este artigo
Agar Mounting: A Basic Method of Mounting Live Zebrafish Embryos for Long-Term Imaging. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20187, doi: (2023).