Alimentação FITC-Dextran: Um método para quantificar a permeabilidade intestinal em C. elegans
Published: April 30, 2023
Abstract
Fonte: Le, T. A. N., et al. Medindo os efeitos de bactérias e produtos químicos na permeabilidade intestinal de caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2019).
Este vídeo introduz um método para visualizar e medir a integridade do lúmen intestinal C. elegans alimentando vermes fitc rotulados dextran. O protocolo de exemplo mostra o ensaio feito com vermes tratados com 3,3′-diindolylmetano (DIM) e alimentados por patógenos.
Protocol
Este protocolo é um trecho de Le et al, Medindo os Efeitos de Bactérias e Produtos Químicos sobre a Permeabilidade Intestinal de Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2019). Preparação de placas de NGM para testar os efeitos de um produto químico (DIM) na P…
Representative Results
Figura 1: O efeito do DIM na permeabilidade intestinal de C. elegans alimentado P. aeruginosa. Imagens de microscopia de vermes de (A) E. coli OP50 sem alimentação FITC-dextran, (B) E. coli com alimentação FITC-dextran, (C) P. aeruginosa</em…
Materials
| 3,3’-diindolylmethane | Sigma | D9568 | |
| 90×15 mm Petri dishes | SPL Life Sciences, South Korea | 10090 | |
| Bactor Agar | Beckton Dickinson | REF. 214010 | |
| Formaldehyde solution | Sigma | F1635 | |
| Caenorhabditis elegans N2 | Caenorhabditis Genetics Center (CGC) | Wild type | |
| Cholesterol | Sigma | C3045 | |
| Costa Assay Plate, 96 Well Black With Clear Flat Bottom Non-treated, No Lid Polystyrene | Corning Incorporated | REF. 3631 | |
| Dimethyl sulfoxide | Sigma | D2650 | |
| Escherichia coli OP50 | Caenorhabditis Genetics Center (CGC) | ||
| Fluorescein isothiocyanate – dextran | Sigma | FD10S | |
| Harmony software | PerkinElmer | verson 3.5 | |
| Magnesium sulfate heptahydrate | Fisher Bioreagents | BP2213-1 | |
| Fluoromount aqueous mounting medium | Sigma | F4680 | |
| Operetta CLS High-Content Analysis System | PerkinElmer | HH16000000 | |
| Peptone | Merck | EMD 1.07213.1000 | |
| Pseudomonas aeruginosa PA01 | Korean Collection for Type Culture | KCTC NO. 1637 | |
| Sodium Chloride | Fisher Bioreagents | BP358-1 | |
| Stereo Microscope | Nikon, Japan | SMZ800N |
Citar este artigo
FITC-Dextran Feeding: A Method to Quantify Intestinal Permeability in C. elegans. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20167, doi: (2023).