FITC-Dextran Feeding: Eine Methode zur Quantifizierung der Darmdurchlässigkeit in C. elegans
Published: April 30, 2023
Abstract
Quelle: Le, T. A. N., et al. Messung der Auswirkungen von Bakterien und Chemikalien auf die Darmdurchlässigkeit von Caenorhabditis elegans. J. Vis. (2019).
Dieses Video stellt eine Methode zur Visualisierung und Messung der Integrität des C. elegans Darmlumendurchfütterer durch Fütterung von Würmern mit FITC-beschrifteter Dextran vor. Das Beispielprotokoll zeigt den Assay mit 3,3′-Diindolylmethan (DIM)-behandelten und pathogen gefütterten Würmern.
Protocol
Dieses Protokoll ist ein Auszug aus Le et al, Messung der Auswirkungen von Bakterien und Chemikalien auf die Darmdurchlässigkeit von Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2019). Herstellung von NGM-Platten zur Prüfung der Auswirkungen einer Chemikalie (DIM) auf…
Representative Results
Abbildung 1: Die Wirkung von DIM auf die Darmdurchlässigkeit von C. elegans gefüttert P. aeruginosa. Mikroskopiebilder von Würmern aus (A) E. coli OP50 ohne FITC-dextran Fütterung, (B) E. coli mit FITC-dextran Fütterung, (C) P. aeruginosa</…
Materials
| 3,3’-diindolylmethane | Sigma | D9568 | |
| 90×15 mm Petri dishes | SPL Life Sciences, South Korea | 10090 | |
| Bactor Agar | Beckton Dickinson | REF. 214010 | |
| Formaldehyde solution | Sigma | F1635 | |
| Caenorhabditis elegans N2 | Caenorhabditis Genetics Center (CGC) | Wild type | |
| Cholesterol | Sigma | C3045 | |
| Costa Assay Plate, 96 Well Black With Clear Flat Bottom Non-treated, No Lid Polystyrene | Corning Incorporated | REF. 3631 | |
| Dimethyl sulfoxide | Sigma | D2650 | |
| Escherichia coli OP50 | Caenorhabditis Genetics Center (CGC) | ||
| Fluorescein isothiocyanate – dextran | Sigma | FD10S | |
| Harmony software | PerkinElmer | verson 3.5 | |
| Magnesium sulfate heptahydrate | Fisher Bioreagents | BP2213-1 | |
| Fluoromount aqueous mounting medium | Sigma | F4680 | |
| Operetta CLS High-Content Analysis System | PerkinElmer | HH16000000 | |
| Peptone | Merck | EMD 1.07213.1000 | |
| Pseudomonas aeruginosa PA01 | Korean Collection for Type Culture | KCTC NO. 1637 | |
| Sodium Chloride | Fisher Bioreagents | BP358-1 | |
| Stereo Microscope | Nikon, Japan | SMZ800N |
Citar este artigo
FITC-Dextran Feeding: A Method to Quantify Intestinal Permeability in C. elegans. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20167, doi: (2023).