Drosophila Optogenética: Um Método para Manipular Circuitos Neuronais
Published: April 30, 2023
Abstract
Fonte: de Vries, S. E., Clandinin, T. Optogentic Stimulation of Escape Behavior in Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (2013).
A optogenética permite o uso da luz para manipular neurônios geneticamente modificados para expressar opsinas específicas – proteínas sensíveis à luz cuja ativação da luz desencadeia uma mudança no estado do neurônio. Aqui descrevemos uma abordagem optogenética em Drosophila usando o opsin Channelrhodopsin2. O protocolo de exemplo apresenta um ensaio optogenético definido para estudar os circuitos neuronais por trás do comportamento de fuga da mosca.
Protocol
Este protocolo é um trecho de de Vries e Clandinin, Optogentic Stimulation of Escape Behavior in Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2013). 1. Gerar moscas channelrhodopsin Cross UAS-ChR2 voa com o motorista Gal4 de sua escolha, usamos G105-Gal4, que é expresso em neurônios Foma-1 no lobo óptico. Para eliminar a possibilidade de uma resposta visual à estimulação da luz azul, ambas as linhas de mosca estão em um fundo w+norpA. <…
Representative Results
Figura 1: Configuração experimental mostrando a plataforma com o suporte vertical e os quatro braços de resfriação segurando dissipadores de calor com matrizes led afixadas a eles. (A) A configuração sob iluminação ambiente. (B) A configuração quando os LEDs estiverem iluminados. (C) Uma visão de perto de um LED Tri-Star na pia de calor. (D) U…
Materials
| Reagent | |||
| All-trans Retinal | Advance Scientific Chemical Inc | R3041 | |
| Equipment | |||
| Heat Sink 9.2 C/W | Luxeonstar | LPD30-30B | 30 mm square X 30 mm high |
| Carclo 18° Tri-Lens | Luxeonstar | 10507 | |
| Blue Rebel LED on Tri-Star Base | Luxeonstar | MR-B0030-20T | 470 nm, 174 lm @ 700 mA. |
| 700 mA BuckPuck DC Driver | Luxeonstar | 3021-D-E-700 | |
| Wiring Harness for BuckPuck Driver | Luxeonstar | 3021-HE | |
| Pre-cut thermal adhesive tape | Luxeonstar | LXT-S-12 | 20 mm Hex Base |
| Snap-Loc Coolant Hose, ¼" ID | McMaster-Carr | 5307K49 | |
| Snap-Loc Coolant Hose Connector | McMaster-Carr | 5307K39 | ¼" NPT Male |
| Laboratory Grade Switching Mode Programmable DC Power Supply | BK Precision | 1698 | |
| Exilim camera | Casio | EX-FH20 |
Citar este artigo
Drosophila Optogenetics: A Method to Manipulate Neuronal Circuits. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20149, doi: (2023).