एक कदम Metabolomics: कार्बोहाइड्रेट्स, कार्बनिक और एमिनो एसिड एक एकल प्रक्रिया में quantified
Summary
मध्यस्थ चयापचयों का विश्लेषण जीसी / एमएस के लिए नमूना तैयार करने की विधि urease इसके आविष्कारक द्वारा प्रस्तुत है. विधि की अनुमति देता है एक कदम बढ़ाता कार्बोहाइड्रेट, एक प्रक्रिया में सभी कार्बनिक और एमिनो एसिड द्वारा नवजात स्क्रीनिंग की सहज त्रुटियों के लिए अनुवर्ती अग्रानुक्रम मास स्पेक्ट्रोमेट्री द्वारा.
Abstract
हर अमेरिका में पैदा हुए शिशु अब 42 दुर्लभ आनुवंशिक विकारों के लिए है के लिए जांच की चयापचय की सहज त्रुटियों "बुलाया. स्क्रीनिंग विधि अग्रानुक्रम मास स्पेक्ट्रोमेट्री पर आधारित है और कार्बनिक acidemias के लिए एक स्क्रीन के रूप में acylcarnitines quantifies और भी अमीनो एसिड के उपाय. सभी राज्यों को भी galactosemia जैसे कार्बोहाइड्रेट विकारों के लिए enzymatic परीक्षण प्रदर्शन करते हैं. क्योंकि परिणाम गैर विशिष्ट, सकारात्मक परिणाम के अनुवर्ती परीक्षण किया जा सकता है एक और अधिक निश्चित पद्धति का उपयोग करके आवश्यक है. वर्तमान रिपोर्ट "urease" जन्मजात त्रुटि जांच के लिए नमूना तैयार करने की विधि का वर्णन है. क्रिस्टलीय urease एंजाइम शरीर के तरल पदार्थ है जो अधिकांश अन्य पानी में घुलनशील चयापचयों निर्जलित और derivatized गैस क्रोमैटोग्राफी के लिए एक ही प्रक्रिया में करने के लिए परमिट से यूरिया को दूर करने के लिए प्रयोग किया जाता है. एक नाइट्रोजन धारा में वाष्पीकरण से निर्जलीकरण acetonitrile और methylene क्लोराइड जोड़कर मदद की है. फिर, trimethylsilylation एक अद्वितीय उत्प्रेरक, triethylammonium trifluoroacetate की उपस्थिति में जगह लेता है. स्वचालित इंजेक्शन और क्रोमैटोग्राफी मैक्रो संचालित 192 चयापचयों और हर प्रमुख घटक टीएमएस derivatized जैविक यौगिकों के बड़े पैमाने पर स्पेक्ट्रा के विशेष पुस्तकालयों का उपयोग कर की मात्रा का ठहराव अर्द्ध कस्टम मात्रा का ठहराव के द्वारा पीछा किया जाता है. विश्लेषण व्यापक रूप से इस्तेमाल किया Chemstation मैक्रोज़ और लेखक की ओर से उपलब्ध पुस्तकालयों का उपयोग कर मंच पर प्रदर्शन किया जा सकता है. कि, नमूने के परिणाम के 17% है निष्कर्ष है कि आदेश चिकित्सक द्वारा पर काम किया जाना चाहिए पता चलता है – हमारी प्रयोगशाला में, 16,000 से अधिक मरीज के नमूनों के बारे में 17% की एक नैदानिक उपज के साथ विधि का उपयोग किया गया विश्लेषण किया है. इन में शामिल 180 पुष्टि की सहज त्रुटियों, जिनमें से 38% के बारे में नहीं किया गया है पिछले विधियों का उपयोग कर निदान सकता है खत्म हो गई हैं.
Protocol
Discussion
urease विधि (1) विभिन्न संशोधनों के साथ चिकित्सा साहित्य में 62 बार उद्धृत किया गया है. मात्सुमोतो समूह (2,3) उच्च throughput नवजात स्क्रीनिंग के लिए प्रक्रिया सरल और 16000 रोगियों से परिणाम की सूचना दी. Kuhara और दूसरों (4-7) सहज त्रुटि निदान के कई मामलों में विधि के प्रयोग की सूचना दी है और अप का पालन करें. Rhead (8) भी नैदानिक निदान के लिए विधि की उपयोगिता की पुष्टि की और सहज त्रुटियों के अप का पालन करें. विधि भालू के मूत्र के लिए लागू किया गया है, चूहों, हाथी, और homogenates पूरे फल मक्खियों और उनके लार्वा (9) के बाहर दस्तक. क्रिप्टोकोकस से पहले और बाद में साइट – निर्देशित mutagenesis संस्कृति मीडिया भी urease कदम (10) के बिना विश्लेषण किया गया . विधि मेडिकल छात्रों में किया गया है मानव पोषण मूल्यांकन करने के लिए लागू, अमीनो tryptophan, methionine और isoleucine एसिड (11) की मौखिक खुराक के साथ विषयों के लदान के बाद डाउन सिंड्रोम के रोगियों और बावला बुजुर्ग दिग्गजों. सभी आठ बी विटामिन तीन अमीनो एसिड है, जो उन के बीच में, उनके गिरावट में कुछ बिंदु पर सभी 8 विटामिन की आवश्यकता के टूटने उत्पादों को बढ़ाता द्वारा मूल्यांकन किया गया. विटामिन अनुपूरण द्वारा दवाइयों और उनके शमन के विषाक्त प्रभाव बताया गया है (12). सामान्य और डाउन सिंड्रोम गर्भधारण से amniotic द्रव के नमूने विश्लेषण किया गया और रिपोर्ट (13-15).
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
एंथोनी थॉमस सक्षम तकनीकी सहायता आभार स्वीकार किया है.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| MSD 5975 | Agilent | GC/MS/Computer | ||
| MSD 5973 | Agilent | GC/MS/Computer | ||
| Urease | Calzyme | 116A0100 | Also Sigma C3 | |
| Stable Isotope Standards | CDN Isotopes, Isotec, Cambridge Isotope Lab | |||
| Solvents | Fisher | |||
| Analytes | Sigma, Universidad Autonoma de Madrid, Ernesto Brunet | |||
| GC Columns | J&W Scientific | 123-5026 | ||
| TEA/TFA | Fluka/Sigma | 09747 | ||
| Vials | Supelco/Sigma | Z115088/12EA | ||
| Merlin Microseal | Agilent | 5181-8815 | ||
| MSTFA | Thermal Scientific | 48913 |
Referências
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