Floresan Mikroskopi için Böcek Bacaklarının İşleniş: Görüntüleme için Nöromüsküler Yapıları Koruma Yöntemi
Published: April 30, 2023
Abstract
Kaynak: Guan, W., vd. Yetişkin Kütikül yoluyla Drosophila Bacak Motor Nöron Aksonları Görselleştirin. J. Vis. Exp. (2018).
Bu videoda, Drosophila yetişkin bacağını görüntüleme analizi için nöromuskülatını sağlam tutarken parçalamak, düzeltmek ve monte etmek için bir yöntem açıklanmaktadır.
Protocol
Bu protokol Guan ve ark.,Visualize Drosophila Leg Motor Neuron Axons Through the Adult Cuticle, J. Vis. Exp. (2018)’den bir alıntıdır. 1. Bacak Diseksiyonu ve Fiksasyonu Bir cam çok kuyulu plaka alın ve uygun sayıda kuyuyu% 70 etanol ile doldurun. Her kuyuya 15-20 CO2-uyuşturulmış sinek (her iki cinsiyet ve herhangi bir yaşta) ekleyin ve bir fırça kullanarak, sinekler tamamen batırılana kadar sinekleri hafifçe etanol çözeltisine …
Representative Results
Şekil 1: Bacakları mikroskop slaytlarına monte etme prosedürü. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Materials
| Ethanol absolute | Fisher | E/6550DF/17 | Absolute analytical reagent grade |
| nonionic surfactant detergent | Sigma-Aldrich | T8787 | Triton X-100, for molecular biology |
| Fine forceps | Sigma-Aldrich | F6521 | Jewelers forceps, Dumont No. 5 |
| Glass multi-well plate | Electron Microscopy Sciences | 71563-01 | 9 cavity Pyrex, 100 mm x 85 mm |
| PFA | Thermofisher | 28908 | Pierc 16% Formaldehyde (w/v), Methanol-free |
| Glycerol | Fisher BioReagents | BP 229-1 | Glycerol (Molecular Biology) |
| Spacers | Sun Jin Lab Co | IS006 | iSpacer, four wells, around 12 μL working volume per well, 7 mm diameter, 0.18 mm deep |
| Square 22 mm x 22 mm coverslips | Fisher Scientific | FIS#12-541-B | No. 1.5-0.16 to 0.19 mm thick |
| Mounting Medium | Vector Laboratories | H-1000 | Vectashield Antifade Mounting Medium |
Citar este artigo
Processing Insect Legs for Fluorescence Microscopy: A Method to Preserve Neuromuscular Structures for Imaging. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20121, doi: (2023).