Traitement des pattes d’insectes pour la microscopie par fluorescence : une méthode pour préserver les structures neuromusculaires pour l’imagerie
Published: April 30, 2023
Abstract
Source : Guan, W., et autres visualisent des axones de neurone moteur de jambe de Drosophila par la cuticule adulte. J. Vis. Exp. (2018).
Cette vidéo décrit une méthode pour disséquer, fixer et monter la jambe adulte de Drosophila tout en préservant sa neuromusculature intacte pour l’analyse d’imagerie.
Protocol
Ce protocole est un extrait de Guan et coll.,Visualize Drosophila Leg Motor Neuron Axons Through the Adult Cuticle, J. Vis. Exp. (2018). 1. Dissection et fixation des jambes Prenez une plaque en verre multi-puits et remplissez le nombre approprié de puits avec 70 % d’éthanol. Ajouter 15-20 mouches anesthésiées au CO 2 (de sexe ou de tout âge) à chaque puits et à l’aide d’une brosse, tamponner doucement les mouches dans la solutiond’étha…
Representative Results
Figure 1 : Procédure de montage des jambes sur des toboggans au microscope. S’il vous plaît cliquez ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.
Materials
| Ethanol absolute | Fisher | E/6550DF/17 | Absolute analytical reagent grade |
| nonionic surfactant detergent | Sigma-Aldrich | T8787 | Triton X-100, for molecular biology |
| Fine forceps | Sigma-Aldrich | F6521 | Jewelers forceps, Dumont No. 5 |
| Glass multi-well plate | Electron Microscopy Sciences | 71563-01 | 9 cavity Pyrex, 100 mm x 85 mm |
| PFA | Thermofisher | 28908 | Pierc 16% Formaldehyde (w/v), Methanol-free |
| Glycerol | Fisher BioReagents | BP 229-1 | Glycerol (Molecular Biology) |
| Spacers | Sun Jin Lab Co | IS006 | iSpacer, four wells, around 12 μL working volume per well, 7 mm diameter, 0.18 mm deep |
| Square 22 mm x 22 mm coverslips | Fisher Scientific | FIS#12-541-B | No. 1.5-0.16 to 0.19 mm thick |
| Mounting Medium | Vector Laboratories | H-1000 | Vectashield Antifade Mounting Medium |
Citar este artigo
Processing Insect Legs for Fluorescence Microscopy: A Method to Preserve Neuromuscular Structures for Imaging. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20121, doi: (2023).