Deze video beschrijft een methode om het drosophila volwassen been te ontleden, te repareren en te monteren, terwijl het neuromusculatuur intact blijft voor beeldvormingsanalyse.
Protocol
Dit protocol is een fragment uit Guan et al., Visualize Drosophila Leg Motor Neuron Axons Through the Adult Cuticle, J. Vis. Exp. (2018). 1. Beendissectie en fixatie Neem een glazen multi-well plaat en vul het juiste aantal putten met 70% ethanol. Voeg 15-20 CO2-verdoofde vliegen (van beide geslachten en elke leeftijd) toe aan elke put en dep met een borstel de vliegen voorzichtig in de ethanoloplossing totdat de vliegen volledig onder water staa…
Representative Results
Figuur 1: Procedure voor het monteren van poten op microscoopglaasjes. Klik hier om een grotere versie van deze afbeelding te bekijken.
Materials
Ethanol absolute
Fisher
E/6550DF/17
Absolute analytical reagent grade
nonionic surfactant detergent
Sigma-Aldrich
T8787
Triton X-100, for molecular biology
Fine forceps
Sigma-Aldrich
F6521
Jewelers forceps, Dumont No. 5
Glass multi-well plate
Electron Microscopy Sciences
71563-01
9 cavity Pyrex, 100 mm x 85 mm
PFA
Thermofisher
28908
Pierc 16% Formaldehyde (w/v), Methanol-free
Glycerol
Fisher BioReagents
BP 229-1
Glycerol (Molecular Biology)
Spacers
Sun Jin Lab Co
IS006
iSpacer, four wells, around 12 μL working volume per well, 7 mm diameter, 0.18 mm deep
Processing Insect Legs for Fluorescence Microscopy: A Method to Preserve Neuromuscular Structures for Imaging. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20121, doi: (2023).