Floresan Mikroskopi için Böcek Bacaklarının İşleniş: Görüntüleme için Nöromüsküler Yapıları Koruma Yöntemi

Published: April 30, 2023

Abstract

Kaynak: Guan, W., vd. Yetişkin Kütikül yoluyla Drosophila Bacak Motor Nöron Aksonları Görselleştirin. J. Vis. Exp. (2018).

Bu videoda, Drosophila yetişkin bacağını görüntüleme analizi için nöromuskülatını sağlam tutarken parçalamak, düzeltmek ve monte etmek için bir yöntem açıklanmaktadır.

Protocol

Bu protokol Guan ve ark.,Visualize Drosophila Leg Motor Neuron Axons Through the Adult Cuticle, J. Vis. Exp. (2018)’den bir alıntıdır. 1. Bacak Diseksiyonu ve Fiksasyonu Bir cam çok kuyulu plaka alın ve uygun sayıda kuyuyu% 70 etanol ile doldurun. Her kuyuya 15-20 CO2-uyuşturulmış sinek (her iki cinsiyet ve herhangi bir yaşta) ekleyin ve bir fırça kullanarak, sinekler tamamen batırılana kadar sinekleri hafifçe etanol çözeltisine …

Representative Results

Şekil 1: Bacakları mikroskop slaytlarına monte etme prosedürü. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Materials

Ethanol absolute Fisher E/6550DF/17 Absolute analytical reagent grade
nonionic surfactant detergent Sigma-Aldrich T8787 Triton X-100, for molecular biology
Fine forceps Sigma-Aldrich F6521 Jewelers forceps, Dumont No. 5
Glass multi-well plate Electron Microscopy Sciences 71563-01 9 cavity Pyrex, 100 mm x 85 mm
PFA Thermofisher 28908 Pierc 16% Formaldehyde (w/v), Methanol-free
Glycerol Fisher BioReagents BP 229-1 Glycerol (Molecular Biology)
Spacers Sun Jin Lab Co IS006 iSpacer, four wells, around 12 μL working volume per well, 7 mm diameter, 0.18 mm deep
Square 22 mm x 22 mm coverslips Fisher Scientific FIS#12-541-B No. 1.5-0.16 to 0.19 mm thick
Mounting Medium Vector Laboratories H-1000 Vectashield Antifade Mounting Medium

Play Video

Citar este artigo
Processing Insect Legs for Fluorescence Microscopy: A Method to Preserve Neuromuscular Structures for Imaging. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20121, doi: (2023).

View Video