Processando pernas de insetos para microscopia de fluorescência: um método para preservar estruturas neuromusculares para imagem
Published: April 30, 2023
Abstract
Fonte: Guan, W., et al. Visualize Drosophila Leg Motor Neuron Axons Through the Adult Cuticle. J. Vis. Exp. (2018).
Este vídeo descreve um método para dissecar, corrigir e montar a perna adulta Drosophila, preservando sua neuromusculatura intacta para análise de imagens.
Protocol
Este protocolo é um trecho de Guan et al., Visualize Drosophila Leg Motor Neuron Axons Through the Adult Cuticle, J. Vis. Exp. (2018). 1. Dissecção e fixação de pernas Pegue uma placa de vidro multi-poço e encha o número apropriado de poços com 70% de etanol. Adicione moscas anestesizadas de 15 a20CO (de ambos os sexos e de qualquer idade) a cada poço e, usando um pincel, desabogue suavemente as moscas na solução de etanol até que as …
Representative Results
Figura 1: Procedimento para montar pernas em lâminas de microscópio. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Materials
| Ethanol absolute | Fisher | E/6550DF/17 | Absolute analytical reagent grade |
| nonionic surfactant detergent | Sigma-Aldrich | T8787 | Triton X-100, for molecular biology |
| Fine forceps | Sigma-Aldrich | F6521 | Jewelers forceps, Dumont No. 5 |
| Glass multi-well plate | Electron Microscopy Sciences | 71563-01 | 9 cavity Pyrex, 100 mm x 85 mm |
| PFA | Thermofisher | 28908 | Pierc 16% Formaldehyde (w/v), Methanol-free |
| Glycerol | Fisher BioReagents | BP 229-1 | Glycerol (Molecular Biology) |
| Spacers | Sun Jin Lab Co | IS006 | iSpacer, four wells, around 12 μL working volume per well, 7 mm diameter, 0.18 mm deep |
| Square 22 mm x 22 mm coverslips | Fisher Scientific | FIS#12-541-B | No. 1.5-0.16 to 0.19 mm thick |
| Mounting Medium | Vector Laboratories | H-1000 | Vectashield Antifade Mounting Medium |
Citar este artigo
Processing Insect Legs for Fluorescence Microscopy: A Method to Preserve Neuromuscular Structures for Imaging. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20121, doi: (2023).