עיבוד רגלי חרקים למיקרוסקופיה פלואורסצנטית: שיטה לשימור מבנים נוירומוסקולריים להדמיה
Published: April 30, 2023
Abstract
מקור: גואן, W., ואח ‘. לדמיין דרוזופילה רגל מוטורי נוירון אקסונים דרך קוטיקל למבוגרים. ג’יי ויס אקספ. (2018).
סרטון זה מתאר שיטה לנתח, לתקן ולהרכיב את הרגל הבוגרת של דרוזופילה תוך שמירה על הנוירו-ממוסקולטורה שלה ללא פגע לצורך ניתוח הדמיה.
Protocol
פרוטוקול זה הוא קטע מתוך גואן ואח ‘.,לדמיין דרוזופילה רגל מוטורי נוירון אקסונים דרך קוטיקל למבוגרים, J. Vis. Exp. (2018). 1. ניתוח רגליים וקיבעון קח צלחת זכוכית רב באר ולמלא את המספר המתאים של בארות עם 70% אתנול. הוסיפו 15-20 CO2- זבובים מורדמים (מכל מין ובכל גיל) לכ?…
Representative Results
איור 1: הליך להרכבת רגליים על שקופיות מיקרוסקופ. לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.
Materials
| Ethanol absolute | Fisher | E/6550DF/17 | Absolute analytical reagent grade |
| nonionic surfactant detergent | Sigma-Aldrich | T8787 | Triton X-100, for molecular biology |
| Fine forceps | Sigma-Aldrich | F6521 | Jewelers forceps, Dumont No. 5 |
| Glass multi-well plate | Electron Microscopy Sciences | 71563-01 | 9 cavity Pyrex, 100 mm x 85 mm |
| PFA | Thermofisher | 28908 | Pierc 16% Formaldehyde (w/v), Methanol-free |
| Glycerol | Fisher BioReagents | BP 229-1 | Glycerol (Molecular Biology) |
| Spacers | Sun Jin Lab Co | IS006 | iSpacer, four wells, around 12 μL working volume per well, 7 mm diameter, 0.18 mm deep |
| Square 22 mm x 22 mm coverslips | Fisher Scientific | FIS#12-541-B | No. 1.5-0.16 to 0.19 mm thick |
| Mounting Medium | Vector Laboratories | H-1000 | Vectashield Antifade Mounting Medium |
Citar este artigo
Processing Insect Legs for Fluorescence Microscopy: A Method to Preserve Neuromuscular Structures for Imaging. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20121, doi: (2023).