Microinjección de células enfermeras de Drosophila: Un método de parto intracelular
Published: April 30, 2023
Abstract
Fuente: Catrina, I. E., et al. Visualización y seguimiento de mRNAs endógenos en cámaras de huevos Drosophila melanogaster en vivo. J. Vis. (2019).
Debido a su gran tamaño y organización relativamente simple, las células enfermeras de Drosophila son ideales para estudios de imágenes de células vivas. Este video describe un método de microinjección para la entrega de compuestos exógenos en las células, y el protocolo destacado demuestra el procedimiento con sondas de oligonucleótidos fluorescentes llamadas balizas moleculares (MBs) utilizadas para visualizar transcripciones endógenas de ARNm.
Protocol
Este protocolo se extrae de Catrina et al., Visualizando y rastreando mRNAs endógenas en cámaras de huevos Drosophila melanogaster en vivo, J. Vis. Exp. (2019). 1. Diseño de MBs para imágenes de células en vivo Doble la secuencia de ARN de destino para predecir la estructura secundaria del objetivo de ARNm utilizando el “formulario de ARN” del servidor mfold (<a href="http://unafold.rna.albany.edu/?q=mfold/RNA-Folding-Form" target="_…
Materials
| Spectrofluorometer | Fluoromax-4 Horiba-Jobin Yvon | n/a | Photon counting spectrofluorometer |
| Quartz cuvette | Fireflysci (former Precision Cells Inc.) | 701MFL | |
| Dumont #5 tweezer | World Precision Instruments | 501985 | Thin tweezers are very important to separate out the individual egg chambers |
| Halocarbon oil 700 | Sigma-Aldrich | H8898 | |
| Cover slip No.1 22 mm x 40 mm | VWR | 48393-048 | |
| Dissecting microscope | Leica MZ6 Leica Microsystems Inc. | n/a | |
| CO2 fruit fly anesthesia pad | Genesee Scienific | 59-114 | |
| Tris-HCL pH 7.5 | Sigma-Aldrich | 1185-53-1 | |
| Magnesium chloride | Sigma-Aldrich | 7791-18-6 | |
| NaCl | Sigma-Aldrich | 7647-14-5 | |
| Spinning disc confocal microscope | Leica DMI-4000B inverted microscope equipped with Yokogawa CSU 10 spinning disc Leica Microsystems Inc. | n/a | |
| Hamamatsu C9100-13 ImagEM EMCCD camera | Hamamatsu | n/a | |
| PatchMan NP 2 Micromanipulator | Eppendorf Inc. | 920000037 | |
| FemtoJet Microinjector | Eppendorf Inc. | 920010504 | |
| Injection needle: Femtotips II | Eppendorf Inc. | 930000043 | |
| Loading tip: 20 μL Microloader | Eppendorf Inc. | 930001007 | |
| Micro Cover glasses no. 1 or 1.5, 22 mm x 40 mm | VWR | 48393-026; 48393-172 | |
| Dry yeast | Any grocery store | n/a | |
| Computer, > 20 GB RAM | Although processing can be carried out on most computers, higher capabilities will increase the speed of the processing |
Citar este artigo
Microinjection of Drosophila Nurse Cells: A Method of Intracellular Delivery. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20109, doi: (2023).