Microinjeção de Células enfermeiras Drosophila: Um Método de Parto Intracelular
Published: April 30, 2023
Abstract
Fonte: Catrina, I. E., et al. Visualizando e Rastreando mRNAs endógenos em Câmaras de Ovos de Melanogaster Drosophila Ao Vivo. J. Vis. Exp. (2019).
Devido ao seu grande tamanho e organização relativamente simples, as células enfermeiras de Drosophila são idealmente adequadas para estudos de imagem de células vivas. Este vídeo descreve um método de microinjeção para a entrega de compostos exógenos nas células, e o protocolo em destaque demonstra o procedimento com sondas oligonucleotídeos fluorescentes chamadas de faróis moleculares (MBs) usados para visualizar transcrições de mRNA endógenos.
Protocol
Este protocolo é extraído de Catrina et al., Visualizando e Rastreando mRNAs endógenos em Câmaras de Ovos de Drosophila Live Drosophila, J. Vis. Exp. (2019). 1. Design de MBs para Imagens de Células Vivas Dobre a sequência de RNA de destino para prever a estrutura secundária do alvo mRNA usando o “formulário RNA” do servidor mfold (http://unafold.rna…
Materials
| Spectrofluorometer | Fluoromax-4 Horiba-Jobin Yvon | n/a | Photon counting spectrofluorometer |
| Quartz cuvette | Fireflysci (former Precision Cells Inc.) | 701MFL | |
| Dumont #5 tweezer | World Precision Instruments | 501985 | Thin tweezers are very important to separate out the individual egg chambers |
| Halocarbon oil 700 | Sigma-Aldrich | H8898 | |
| Cover slip No.1 22 mm x 40 mm | VWR | 48393-048 | |
| Dissecting microscope | Leica MZ6 Leica Microsystems Inc. | n/a | |
| CO2 fruit fly anesthesia pad | Genesee Scienific | 59-114 | |
| Tris-HCL pH 7.5 | Sigma-Aldrich | 1185-53-1 | |
| Magnesium chloride | Sigma-Aldrich | 7791-18-6 | |
| NaCl | Sigma-Aldrich | 7647-14-5 | |
| Spinning disc confocal microscope | Leica DMI-4000B inverted microscope equipped with Yokogawa CSU 10 spinning disc Leica Microsystems Inc. | n/a | |
| Hamamatsu C9100-13 ImagEM EMCCD camera | Hamamatsu | n/a | |
| PatchMan NP 2 Micromanipulator | Eppendorf Inc. | 920000037 | |
| FemtoJet Microinjector | Eppendorf Inc. | 920010504 | |
| Injection needle: Femtotips II | Eppendorf Inc. | 930000043 | |
| Loading tip: 20 μL Microloader | Eppendorf Inc. | 930001007 | |
| Micro Cover glasses no. 1 or 1.5, 22 mm x 40 mm | VWR | 48393-026; 48393-172 | |
| Dry yeast | Any grocery store | n/a | |
| Computer, > 20 GB RAM | Although processing can be carried out on most computers, higher capabilities will increase the speed of the processing |
Citar este artigo
Microinjection of Drosophila Nurse Cells: A Method of Intracellular Delivery. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20109, doi: (2023).