ショウジョウバエナース細胞の微小注射:細胞内送達法
Published: April 30, 2023
Abstract
出典: Catrina, I. E., 他. ライブ ショウジョウバエメラノガスター 卵室で内因性の mRNA を視覚化し、追跡. J. ヴィス・エクス (2019).
その大きなサイズと比較的単純な組織のために、 ショウジョウバエ の看護師細胞は、生細胞イメージング研究に理想的に適しています。このビデオでは、外因性化合物を細胞に送達するためのマイクロインジェクション法について説明し、注目のプロトコルは、内因性mRNA転写物を視覚化するために使用される分子ビーコン(MB)と呼ばれる蛍光オリゴヌクレオチドプローブによる手順を示しています。
Protocol
このプロトコルは、Catrinaらから抜粋され、生のショウジョウバエメラノガスター卵室、J.Vis. Expの内因性mRNAを視覚化および追跡する。(2019). 1. ライブセルイメージング用のMBの設計 標的RNA配列を折り畳んで、mfoldサーバからの「RNA形態」を用いてmRNA標的の二次構造を予測する<a href="http://unafold.rna.albany.edu/?q=mfold/RNA-Folding-Form" target="_…
Materials
| Spectrofluorometer | Fluoromax-4 Horiba-Jobin Yvon | n/a | Photon counting spectrofluorometer |
| Quartz cuvette | Fireflysci (former Precision Cells Inc.) | 701MFL | |
| Dumont #5 tweezer | World Precision Instruments | 501985 | Thin tweezers are very important to separate out the individual egg chambers |
| Halocarbon oil 700 | Sigma-Aldrich | H8898 | |
| Cover slip No.1 22 mm x 40 mm | VWR | 48393-048 | |
| Dissecting microscope | Leica MZ6 Leica Microsystems Inc. | n/a | |
| CO2 fruit fly anesthesia pad | Genesee Scienific | 59-114 | |
| Tris-HCL pH 7.5 | Sigma-Aldrich | 1185-53-1 | |
| Magnesium chloride | Sigma-Aldrich | 7791-18-6 | |
| NaCl | Sigma-Aldrich | 7647-14-5 | |
| Spinning disc confocal microscope | Leica DMI-4000B inverted microscope equipped with Yokogawa CSU 10 spinning disc Leica Microsystems Inc. | n/a | |
| Hamamatsu C9100-13 ImagEM EMCCD camera | Hamamatsu | n/a | |
| PatchMan NP 2 Micromanipulator | Eppendorf Inc. | 920000037 | |
| FemtoJet Microinjector | Eppendorf Inc. | 920010504 | |
| Injection needle: Femtotips II | Eppendorf Inc. | 930000043 | |
| Loading tip: 20 μL Microloader | Eppendorf Inc. | 930001007 | |
| Micro Cover glasses no. 1 or 1.5, 22 mm x 40 mm | VWR | 48393-026; 48393-172 | |
| Dry yeast | Any grocery store | n/a | |
| Computer, > 20 GB RAM | Although processing can be carried out on most computers, higher capabilities will increase the speed of the processing |
Citar este artigo
Microinjection of Drosophila Nurse Cells: A Method of Intracellular Delivery. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20109, doi: (2023).