מיקרו-ג'ינגציה של תאי אחות דרוזופילה: שיטה ללידה תאית
Published: April 30, 2023
Abstract
מקור: קטרינה, I. E., ואח ‘. הדמיה ומעקב אחר mRNAs אנדוגני ב חי Drosophila מלנוגסטר ביצה צ’יימברס. ג’יי ויס אקספ. (2019).
בשל גודלם הגדול וארגון פשוט יחסית, תאי האחות Drosophila מתאימים באופן אידיאלי למחקרי הדמיית תאים חיים. וידאו זה מתאר שיטת microinjection עבור משלוח תרכובות אקסוגני לתוך התאים, ואת הפרוטוקול בהשתתפות מדגים את ההליך עם בדיקות אוליגונוקלאוטיד פלואורסצנטי שנקרא משואות מולקולריות (MBs) המשמשים לדמיין תעתיקים mRNA אנדוגני.
Protocol
פרוטוקול זה הוא קטע מתוך קטרינה ואח ‘.,הדמיה ומעקב אחר mRNAs אנדוגני ב חי Drosophila מלנוגאסטר ביצה צ’יימברס, J. Vis. Exp. (2019). 1. עיצוב MBs להדמיית תאים חיים מקפלים את רצף RNA היעד כדי לחזות את המבנה המשני של יעד mRNA באמצעות “טופס RNA” משרת mfold (<a href="http://unafold.rna.albany.edu/?q=…
Materials
| Spectrofluorometer | Fluoromax-4 Horiba-Jobin Yvon | n/a | Photon counting spectrofluorometer |
| Quartz cuvette | Fireflysci (former Precision Cells Inc.) | 701MFL | |
| Dumont #5 tweezer | World Precision Instruments | 501985 | Thin tweezers are very important to separate out the individual egg chambers |
| Halocarbon oil 700 | Sigma-Aldrich | H8898 | |
| Cover slip No.1 22 mm x 40 mm | VWR | 48393-048 | |
| Dissecting microscope | Leica MZ6 Leica Microsystems Inc. | n/a | |
| CO2 fruit fly anesthesia pad | Genesee Scienific | 59-114 | |
| Tris-HCL pH 7.5 | Sigma-Aldrich | 1185-53-1 | |
| Magnesium chloride | Sigma-Aldrich | 7791-18-6 | |
| NaCl | Sigma-Aldrich | 7647-14-5 | |
| Spinning disc confocal microscope | Leica DMI-4000B inverted microscope equipped with Yokogawa CSU 10 spinning disc Leica Microsystems Inc. | n/a | |
| Hamamatsu C9100-13 ImagEM EMCCD camera | Hamamatsu | n/a | |
| PatchMan NP 2 Micromanipulator | Eppendorf Inc. | 920000037 | |
| FemtoJet Microinjector | Eppendorf Inc. | 920010504 | |
| Injection needle: Femtotips II | Eppendorf Inc. | 930000043 | |
| Loading tip: 20 μL Microloader | Eppendorf Inc. | 930001007 | |
| Micro Cover glasses no. 1 or 1.5, 22 mm x 40 mm | VWR | 48393-026; 48393-172 | |
| Dry yeast | Any grocery store | n/a | |
| Computer, > 20 GB RAM | Although processing can be carried out on most computers, higher capabilities will increase the speed of the processing |
Citar este artigo
Microinjection of Drosophila Nurse Cells: A Method of Intracellular Delivery. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20109, doi: (2023).