Drosophila Hemşire Hücrelerinin Mikroenjeksiyonu: Hücre İçi Doğum Yöntemi
Published: April 30, 2023
Abstract
Kaynak: Catrina, I. E., vd. Canlı Drosophila melanogaster Yumurta Odalarında Endojen mRNA’ları Görselleştirme ve İzleme. J. Vis. Exp. (2019).
Büyük boyutları ve nispeten basit organizasyonları nedeniyle, Drosophila hemşire hücreleri canlı hücre görüntüleme çalışmaları için idealdir. Bu videoda hücrelere eksojen bileşiklerin teslimi için bir mikroenjeksiyon yöntemi açıklanmaktadır ve öne çıkan protokol, endojen mRNA transkriptlerini görselleştirmek için kullanılan moleküler işaretçiler (MB) adı verilen floresan oligonükleotid probları ile prosedürü göstermektedir.
Protocol
Bu protokol Catrina ve ark.,Canlı Drosophila melanogaster Yumurta Odalarında Endojen mRNA’ları Görselleştirme ve İzleme, J. Vis. Exp’ten alıntılanmıştır. (2019). 1. Canlı Hücre Görüntüleme için MB Tasarımı MFOLD sunucusundan(http://unafold.rna.albany.edu/?q=mfold/RNA-Folding-Form)”RNA formunu” kullanarak mRNA hedefinin ikincil yapıs?…
Materials
| Spectrofluorometer | Fluoromax-4 Horiba-Jobin Yvon | n/a | Photon counting spectrofluorometer |
| Quartz cuvette | Fireflysci (former Precision Cells Inc.) | 701MFL | |
| Dumont #5 tweezer | World Precision Instruments | 501985 | Thin tweezers are very important to separate out the individual egg chambers |
| Halocarbon oil 700 | Sigma-Aldrich | H8898 | |
| Cover slip No.1 22 mm x 40 mm | VWR | 48393-048 | |
| Dissecting microscope | Leica MZ6 Leica Microsystems Inc. | n/a | |
| CO2 fruit fly anesthesia pad | Genesee Scienific | 59-114 | |
| Tris-HCL pH 7.5 | Sigma-Aldrich | 1185-53-1 | |
| Magnesium chloride | Sigma-Aldrich | 7791-18-6 | |
| NaCl | Sigma-Aldrich | 7647-14-5 | |
| Spinning disc confocal microscope | Leica DMI-4000B inverted microscope equipped with Yokogawa CSU 10 spinning disc Leica Microsystems Inc. | n/a | |
| Hamamatsu C9100-13 ImagEM EMCCD camera | Hamamatsu | n/a | |
| PatchMan NP 2 Micromanipulator | Eppendorf Inc. | 920000037 | |
| FemtoJet Microinjector | Eppendorf Inc. | 920010504 | |
| Injection needle: Femtotips II | Eppendorf Inc. | 930000043 | |
| Loading tip: 20 μL Microloader | Eppendorf Inc. | 930001007 | |
| Micro Cover glasses no. 1 or 1.5, 22 mm x 40 mm | VWR | 48393-026; 48393-172 | |
| Dry yeast | Any grocery store | n/a | |
| Computer, > 20 GB RAM | Although processing can be carried out on most computers, higher capabilities will increase the speed of the processing |
Citar este artigo
Microinjection of Drosophila Nurse Cells: A Method of Intracellular Delivery. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20109, doi: (2023).